[发明专利]链球菌M蛋白,免疫原性片段,核酸和应用方法

说明书

发明领域

本发明涉及具体的蛋白和核酸。更具体地，本发明涉及海豚链球菌(Streptococcus iniae)的分离的蛋白和核酸，以及它们在诊断和/或治疗动物尤其是鱼中的海豚链球菌感染的用途。

发明背景

最近十多年来，海豚链球菌已变成最严重的水生病原体，在较温暖地区给养殖的海水和淡水水族(farmed marine and freshwater finfish)带来非常大的损失。海豚链球菌首先是在1976年从一只被囚禁的亚马逊淡水海豚中发现的，并因此而以海豚命名该菌，它遍及全球的暖水水族养殖场。迄今为止发现的易感于海豚链球菌感染的鱼类参见Agnew&Barnes，2007，Vet.Microbiol.1221的综述。

海豚链球菌还具有人畜共患潜质，已在美国、加拿大和整个亚洲都发现了人类感染。人类的感染明显是机会性的，迄今发现的所有病例都与制备已被污染的鱼期间穿刺伤的直接感染有关，一般以老人或免疫力低下的个体好发(Agnew&Barnes，2007，同上)。

已知抗体能有效治疗一些鱼的感染。还发现恩诺沙星(Enrofloxacin)、土霉素(oxytetracycline)、呋喃唑酮(furazolidone)和阿莫西林(amoxicillin)能用于治疗鱼的海豚链球菌感染，只是它们的效力在不同物种之间有差异。然而，养殖场使用抗微生物制剂受到一些限制，也有一些担心。首先是密集群体间的耐药性选择。其次引起注意的是人用养殖鱼中药物的残留。

最近发展出的一种控制海豚链球菌的方法是疫苗接种。以色列在1995至1997年已成功开始一项针对养殖的虹鳟的计划，用由全细胞福尔马林灭活的海豚链球菌组成的自体疫苗进行腹腔注射(Bercovier et al.，1996，Immunization with Bacterial Antigens：infections with streptococci and relatedorganisms.Second International Symposium in Fish Vaccinology pp153-60；Eldar et al.，1997，Vet.Immunol.Immunpathol.56 175)。鱼群受到4个月的保护，这覆盖了虹鳟在以色列的短短繁殖周期的绝大部分时间段(Bercovier etal.，1996，同上)。上加利利(Upper Galilee)地区的大规模接种项目使每年因海豚链球菌导致的死亡率从50％降低到5％以下(Eldar et al.，1997，同上)。有证据表明，保护作用的基本机制是由抗体介导的，可能是对基于热稳定蛋白的抗原决定簇起反应而产生的(Bercovier et al.，1996，同上)。

抗体在提供保护作用方面所起的作用的证据还得到以下支持：有数据显示，用抗海豚链球菌血清对罗非鱼(tilapia)进行被动免疫也有保护(Shelbyet al.，2002，J.Fish.Dis.251)。但是，该接种计划的成功是短暂的。1997年，由于这种细菌产生新的变体，引起非常多次的新爆发流行。与之前的分离物不同，这种变体是精氨酸双水解酶和核糖阴性，似乎改变了它的荚膜组成(Bachrach et al.，2001，Appl.Environ.Microbiol.67 3756；Zlotkin et al.，1998，Appl.Environ.Microbiol.64 4065)。已显示，以色列的接种计划使一些病原体残存在鱼体内或环境中，有足够的选择压力使得一种明显不同的血清型占据了主导地位(Bachrach et al.，2001，同上)。

最近，在亚洲部分地区出现了两种新疫苗能针对海豚链球菌感染提供保护。一种是单价灭活疫苗(Norvaxl Strep Si)，可以以浸没制剂(immersion)或注射制剂的形式使用。先灵葆雅(Schering-Plough)开发了AquaVac^TMGarvetil^TM，它提供针对海豚链球菌和格氏乳球菌(Lactococcus garvieae)的联合保护作用，可以以浸没制剂的形式给予，或者加在食物中口服。

尽管已有海豚链球菌疫苗，这种病原体仍然是鱼类和其它动物中的主要问题。因此，仍需要鉴定和分离海豚链球菌中能用于诊断和/或治疗动物的海豚链球菌感染的分子成分。

发明概述