[发明专利]鱼疫苗

说明书

本发明涉及用于对抗鱼中的细菌感染的组合疫苗、细菌用于制造这种疫苗的用途、制备这种疫苗的方法和试剂套盒。

在过去的十年中，全世界的鱼消费量有着强劲的增长。这同样关系到冷水鱼如鲑鱼、大菱鲆、大比目鱼和鳕鱼，以及热带鱼如亚洲海鲈、罗非鱼、遮目鱼、黄尾鱼、琥珀鱼、石斑鱼、鲷鱼和军曹鱼的消费量。

因此，养鱼场的数量和规模有所增加，以满足日益增加的市场需求。

例如，从畜牧业得知，在大规模商业饲养时期之前，大量密切生活在一起的动物易受各种疾病的攻击，甚至几乎都不知道或看到患病，或甚至是未知的。在鱼饲养中同样是这种情况。发现鱼致病性的细菌属于诺卡氏菌属(Nocardia)、弧菌属(Vibrio)、巴斯德氏菌属(Pasteurella)、发光杆菌属(Photobacterium)、Tenacibaculum、黄杆菌属(Flavobacterium)、屈挠杆菌属(Flexibacter)、嗜纤维菌属(Cytophaga)、弗朗西丝氏菌属(Francisella)、分枝杆菌属(Mycobacterium)、链球菌属(Streptococcus)、乳球菌属(Lactococcus)或爱德华氏菌属(Edwardsiella)。

在诺卡氏菌属种中，黄尾脾脏诺卡氏菌(Nocardia seriolae)在温水鱼中引起慢性问题。鱼饲养中由诺卡氏菌感染引起的损害在过去几年中一直在增加。特别地，黄尾鱼(Seriolae quinqueradiata)、琥珀鱼(Seriolae dumerelli)、海鲈(Lateolabrax japonicus)、黄花鱼(Lamitichthys crocea)、鲳鱼(Pampus argenteus)、马鲅(Eleutheronema tetradactylum)、鲷鱼(Lutjanus sp)、石斑鱼(Epinephelus sp)和鲹鱼(Caranx sexfasciatus)已经受到诺卡氏菌感染的影响。

常常称为海洋诺卡氏菌病的疾病开始是隐性感染。其在鱼苗和幼鱼中产生。细菌在主要器官如脾脏、肝脏和肾脏中繁殖。

由于低增殖速率，在任何可见症状出现之前，细菌可以在鱼组织内繁殖很长时间。因此，将该疾病称为慢性的。只要作为慢性特征的结果，在呈现出疾病爆发之前鱼通常已经有300至1000g重，因此经济损失是巨大的。

研究表明与患病幼鱼(之前被活的诺卡氏菌感染的)共用鱼池空间的黄尾鱼在共栖3个月后最终呈现出内在病状(它们的脾脏中出现肉芽肿)。在海洋长须鲸培养中，发现诺卡氏菌感染在水温达到24℃或更高的夏季的几个月中更快地进展，但由于诺卡氏菌的死亡率在秋季和初冬的几个月中更常出现而在这期间较高，因为鱼必须适应新的环境状况并且其免疫系统变弱。

诺卡氏菌似乎是免疫系统对抗自身的非常差的诱导剂，因为尽管该疾病的进展非常缓慢，但免疫系统没有设法清除感染。这也可以解释不存在有效对抗诺卡氏菌感染的疫苗的事实。含有活的减毒或灭活细菌的疫苗在某种程度上模拟了自然感染，但如果自然感染都不能诱导适当的免疫应答，就不能期望疫苗能够更好地发挥作用。

显然非常需要有效的疫苗。

本发明的目的是提供对抗诺卡氏菌感染的有效疫苗。

现在令人惊讶地发现了不仅含有黄尾脾脏诺卡氏菌，而且另外至少含有格氏乳球菌(Lactococcus garviae)、美人鱼发光杆菌杀鱼亚种(Photobacterisum damselae subsp.piscicidae)(＝杀鱼巴斯德氏菌(Pasteurella piscicida))和鳗弧菌(Vibrio anguillarum)种类的细菌的组合疫苗不仅提供了对抗格氏乳球菌、杀鱼巴斯德氏菌和鳗弧菌的高水平的保护，而且提供了出人意料地高于通过单价黄尾脾脏诺卡氏菌疫苗获得的保护水平的对抗黄尾脾脏诺卡氏菌的保护水平。

因此，本发明的第一个实施方案涉及用于对抗鱼中的诺卡氏菌感染的组合疫苗，其特征在于所述疫苗含有格氏乳球菌、杀鱼巴斯德氏菌、鳗弧菌和黄尾脾脏诺卡氏菌的细菌以及药物学上可接受的载体。

对于该疫苗的制造，细菌的状态；活的或是灭活的，实际上并不重要。认为重要的是鱼中对抗诺卡氏菌的诺卡氏菌特异性免疫性的刺激剂仍然存在的事实。

这可以通过使用完整的细菌制剂来确保。如上所述，制剂中的细菌是活的、杀灭的乃至是碎裂的(例如，通过使用法式压机)不重要。