[发明专利]通过对接和锁定(DNL)技术的聚乙二醇化

说明书

相关申请

本申请要求2007年10月26日提交的美国专利申请序列第11/925408号的优先权，在此引入其全部内容作为参考。

背景技术

可以经过多种方式，通过改进治疗剂的生物利用度来增强其效力，其中一种方式是聚乙二醇化，即将聚乙二醇化学连接到目标治疗剂上的过程，而所得轭合物展现出增加的血清半衰期。聚乙二醇化产物的其他优点还可以包括更低的免疫原性、降低的服药频率、增加的溶解度、增强的稳定性和减少的肾清除。由于蛋白质(包括肽)上用来连接PEG的最通常的反应位点为赖氨酸的ε氨基基团和N-末端残基的α氨基基团，所以早期的聚乙二醇化方法造成多位点修饰，不仅产生由位置异构体混合物组成的单聚乙二醇化轭合物，例如PEGINTRON^TM(Grace等人，J.Biol.Chem.2005；280：6327)和(Dhalluin等人，Bioconjugate Chem.2005；16：504)，而且还产生包括多于一个PEG链的加合物。据报道，单一PEG与N-末端残基的α氨基基团的位点特异性连接是PEG-乙醛(PEG-ALD)与IFN-β1b(Basu等人，Bioconjugate Chem.2006；17：618)或IFN-β1a(Pepinsky等人，J.Pharmacol.Exp.Ther.2001；297：1059)在低PH下反应的主要产物。类似的策略应用于制备N-末端连接PEG的G-CSF(Kinstler等人，Pharm.Res.1996；13：996)或I型可溶的肿瘤坏死因子受体(Kerwin等人，Protein Sci.2002；11：1825)。最近报道了一种用于重组干扰素α-2a的N-末端PEG化的固相过程(Lee等人，Bioconjug.Chem.Oct.18，2007，epub)。

对于几种重组构建体，还实现了利用PEG-马来酰亚胺(PEG-MAL)对引入目标蛋白质的游离半胱氨酸残基进行的位点定向聚乙二醇化，所述重组构建体包括IL-2(Goodson和Katre，Biotechnology.1990：8：343)；IFN-α2(Rosendahl等人，Bioconjugate Chem.2005；16：200)；GM-CSF(Doherty等人，Bioconjugate Chem.2005；16：1291)；scFv(Yang等人，Protein Eng.2003；16：761)，和微型抗体(Kubetzko等人，J.Biol.Chem；2006；201：35186)。用于提高酶治疗效力的常用途径是制备含有多个小型PEG的轭合物，如已知用于甲硫氨酸酶(Yang等人，Cancer Res.2004；64：6673)；L-甲硫氨酸γ-裂解酶(Takakura等人，Cancer Res.2006：66：2807)；精氨酸脱氨酶(Wang等人，Bioconjugate Chem.2006；17：1447)；腺苷脱氨酶(Davis等人，Clin.Exp.Immunol.1981；46：649)；L-天冬酰胺酶(Bendich等人，Clin.Exp.Immunol.1982；48：273)；和肝过氧化氢酶(Abuchowski等人，J.Biol.Chem.1977；252：3582)。

还描述了牛血清白蛋白(Abuchowski等人，J.Biol.Chem.1977；252：3578)；血红蛋白(Manjula等人，Bioconjugate Chem.2003；14：464)；visomant(Mosharraf等人，Int.J.Pharm.2007；336：215)；小分子物质，例如整联蛋白α4β1的抑制剂(Pepinsky等人，J.Pharmacol.Exp.Ther.2005；312：742)；淋巴瘤靶向肽(DeNardo等人，Clin.Cancer.Res.2003；9(Suppl.)：3854s)；抗-VEGF适体(Bunka和Stockley，Nat.Rev.Microbiol.2006；4：588)和寡聚脱氧核苷酸(Fisher等人，Drug Metab.Dispos.2004；32：983)的聚乙二醇化。但是，存在对于聚乙二醇化的通用方法的需求，该方法能专有地产生单聚乙二醇化的轭合物，该轭合物由部分特异性连接到候选试剂的预定位置的单一PEG组成，并保持未修饰的对应物的生物活性。

发明概述