[发明专利]核酸复合体及核酸转运用组合物

说明书

技术领域

本发明涉及一种可持续地滞留在细胞内、低毒性且高安全性的核酸复合体，及核酸转运用组合物。

背景技术

近年，随着生物技术的发展，已经发现了多种在细胞内发挥生理活性功能的核酸。例如已知siRNA(small interfering RNA：小干涉RNA)可引起存在于细胞内的靶基因的mRNA分解，阻碍靶基因表达(RNAinterference：RNA干涉)。由此RNA干涉产生的阻碍靶基因表达的功能，在缓解或治疗由特定的基因或基因组的异常表达而引起的疾病症状方面是有用的，故人们期待将siRNA开发用作治疗药。但是，在包括siRNA治疗的基因治疗中，由于核酸是具有负电荷的水溶性高分子，所以其具有非常低的向细胞内的基因转运效率，导致无法得到有效的治疗效果。

目前，为了有效地将基因转运至细胞内，已知有利用载体(运载体)的技术。运载体分为病毒性运载体及非病毒性运载体。病毒性运载体显示出高核酸导入效率，但是在病原性、免疫原性及细胞毒性等安全性方面存在许多不明之处。因此，在临床应用中期待使用非病毒性运载体。

非病毒性运载体的例子包括已经市售的Lipofectamine ^TM2000。进而，报道了一种具有特定结构的阳离子性脂质(参见专利文献1)；一种含有两亲性化合物及聚阳离子的组合物(参见专利文献2)。利用非病毒性运载体将核酸转运至细胞内如下进行：首先将应转运的核酸与非病毒性运载体混合形成复合体，然后使该复合体与靶细胞接触。非病毒性运载体可以形成脂质体时，核酸在被封入脂质体内的状态下参入到细胞内，从而使核酸转运至细胞内。

但是，siRNA等核酸具有稳定性低、电荷强的特有的性质。因此，核酸与非病毒性运载体混合时，导致稳定性降低、持续的核酸向细胞内的导入被抑制。虽然已知通过形成siRNA与阳离子性聚合物的复合体将核酸封入脂质体内的例子(参见非专利文献1)，但从阳离子性聚合物的细胞毒性的观点考虑，一般认为在实用性上并不可用。进而，即使利用核酸与现有的非病毒性运载体形成稳定的复合体时，该复合体也可能具有低的向细胞内的转运能力或者可能迅速地被转运到细胞内。因此，上述现有的非病毒性运载体无法将核酸持续地保持在细胞内，无法发挥基于核酸的所期望的效果。

鉴于上述现有技术，迫切期望开发出一种低毒性且高安全性、能有效地将核酸(例如siRNA)转运至细胞内、并且持续地保持核酸的技术。

专利文献1：日本特表2002-529439号公报

专利文献2：日本特表2005-508394号公报

非专利文献1：Kentaro Kogure et al.，Development of a non-viral-multifunctional-envelope-type nano device by a novel lipid filmhydration method，J.Control.Release，98(2004)317-323

发明内容

本发明的目的在于解决上述现有技术课题。具体而言，本发明的目的在于提供一种低毒性且高安全性的、可以将siRNA等核酸持续地保持在细胞内的核酸复合体，以及能够有效地将核酸复合体转运至细胞内的核酸转运用组合物。本发明的另一个目的在于提供一种含有核酸转运用组合物的药物组合物，以及通过使核酸转运用组合物与细胞接触，将核酸转运至细胞内的方法。

本发明人等为了解决上述问题，经过反复研究，结果发现通过使用导入细胞内的核酸与高支化环糊精形成复合体，可以得到低毒性且高安全性的、能够将核酸持续地保持在细胞内的核酸复合体。本发明人等还发现通过使用含有下述物质的载体作为用于将该核酸复合体导入细胞内的核酸转运用载体，可以进一步提高安全性、细胞内转运的有效性及细胞内核酸的持续性，所述物质包括：(A)二酰基磷脂酰胆碱、(B)胆固醇及/或其衍生物、以及(C)脂肪族伯胺。本发明是基于上述发现通过进一步深入研究而完成的。

本发明提供下述项：

项1、一种核酸复合体，其特征在于，含有核酸及高支化环糊精。

项2、如项1所述的核酸复合体，其中，相对于1重量份核酸，高支化环糊精的量为1～4000重量份。

项3、如项1或2所述的核酸复合体，其中，核酸为siRNA。

项4、如项1～3中任一项所述的核酸复合体，其中，高支化环糊精是具有内支环结构部分和外支化结构部分的、聚合度为50～5000的葡聚糖，所述内支环结构部分由α-1，4-糖苷键及至少一个α-1，6-糖苷键形成，所述外支化结构部分与所述内支环结构部分连接。