[发明专利]用于检测恰菲埃里希氏体(VLPT)的方法和组合物

说明书

优先权

本申请要求2007年9月21日提交的U.S.Ser.No.60/974,196的权益，通过完全引用将其合并在此。

发明背景

埃里希氏体属是感染哺乳动物宿主中的循环淋巴细胞的专性细胞内的病原体。犬埃里希氏体(Ehrlichia canis)和恰菲埃里希氏体(Ehrlichia chaffeensis)是感染犬和人类的同一亚属组的成员，可以各自分别引起犬单核细胞埃里希氏体病(CME)和人类单核细胞埃里希氏体病(HME)。犬疾病的特征在于发烧、淋巴结病、体重损失和全血细胞减少。在人类中，疾病的特征在于发烧、头痛、mylagia和白血球减少。早期检测和治疗对于治疗犬和人类埃里希氏体病都是重要的。

间接的免疫荧光分析(IFA)和酶联免疫吸附测定(ELISA)经常用作这些疾病的诊断中的辅助。这些分析测量或检测来自患者的血液、血浆或血清的抗埃里希氏体属抗体与受感染细胞、细胞溶胞产物或纯化的埃里希氏体属蛋白质的结合。然而，用于检测抗恰菲埃里希氏体抗体或其片段的许多分析在有用性方面是严重受限的，因为直接与这些测试中使用的埃里希氏体属抗原的不纯性质相关的敏感性和特异性问题。另外，对犬埃里希氏体接种的动物由于免疫交叉反应在测试恰菲埃里希氏体时显示阳性结果。需要高度纯化的、特异性的试剂来构建更精确的分析。

发明概述

本发明的一个实施方式提供了包含SEQ ID NO：3的纯化的多肽，其中所述多肽由少于约50个连续的天然存在的恰菲埃里希氏体氨基酸组成；包含SEQ ID NO：2的纯化的多肽，其中所述多肽由少于约50个连续的天然存在的恰菲埃里希氏体氨基酸组成；包含SEQ IDNO：1的纯化的多肽，其中所述多肽由少于约50个连续的天然存在的恰菲埃里希氏体氨基酸组成。所述纯化的多肽可以由SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：1组成。本发明还提供了编码本发明的纯化的多肽的分离的多核苷酸。

本发明的纯化的多肽可以连接到指示物试剂、氨基酸间隔区、氨基酸接头、信号序列、终止转移序列、跨膜结构域、蛋白质纯化配体、异源多肽、包含SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6的一个或更多个另外的多肽，或其组合。本发明的纯化的多肽可以在多肽的氨基末端或羧基末端或两个末端包含一个或更多个C氨基酸残基。

本发明的另一个实施方式提供了检测特异性结合测试样品中的恰菲埃里希氏体多肽的抗体的方法。所述方法包括在容许多肽/抗体复合物形成的条件下使包含SEQ ID NO：1、2、3、5或6的纯化的多肽与所述测试样品接触；其中所述纯化的多肽由少于约50个连续的天然存在的恰菲埃里希氏体氨基酸组成；和检测所述多肽/抗体复合物。所述多肽/抗体复合物的检出是所述测试样品中存在特异于恰菲埃里希氏体的抗体的指示，没有所述多肽/抗体复合物是所述测试样品中不存在特异于恰菲埃里希氏体的抗体的指示。所述复合物可以在进行检测步骤之前接触指示物试剂。在本发明的一个实施方式中，所述纯化的多肽是SEQ ID NO：1-3、5或6，所述方法不检测特异性结合犬埃里希氏体多肽的抗体。可以测定测试样品中抗体的量。纯化的多肽可以附着到基质上。纯化的多肽可以连接到指示物试剂、氨基酸间隔区、氨基酸接头、信号序列、终止转移序列、跨膜结构域、蛋白质纯化配体、异源蛋白质、包含SEQ ID NO：1、2、3、4、5或6的一个或更多个另外的多肽，或其组合。

本发明的再另一个实施方式提供了检测受试者中恰菲埃里希氏体感染的方法。所述方法包括从所述受试者获得生物样品；在容许多肽/抗体复合物形成的条件下使包含SEQ ID NO：1、2、3、5或6的纯化的多肽与所述生物样品接触；其中所述纯化的多肽由少于约50个连续的天然存在的恰菲埃里希氏体氨基酸组成；和检测所述多肽/抗体复合物。所述多肽/抗体复合物的检出是所述受试者具有恰菲埃里希氏体感染的指示，没有所述多肽/抗体复合物是所述受试者没有恰菲埃里希氏体感染的指示。在本发明的一个实施方式中，所述纯化的多肽是SEQ ID NO：1、2、3、5或6，所述方法不检测所述受试者中的犬埃里希氏体感染。

本发明的另一个实施方式提供了特异性结合由SEQ ID NO：1、2、3、5或6组成的多肽的抗体。所述抗体可以是单克隆抗体、多克隆抗体、抗原结合抗体片段或单链抗体。