[发明专利]免疫球蛋白聚集体

权利要求书

1.通过切向流过滤获得浓缩的免疫球蛋白溶液的方法，特征在于所述的方法包括以下步骤：

i)提供待浓缩的含有免疫球蛋白的溶液，其中所述的免疫球蛋白以单体形式和聚合形式存在于所述溶液中，当通过尺寸排阻色谱法测定时，存在于所提供的溶液中的聚合可溶免疫球蛋白形式的份额具有超过2.5％的第一个值；

ii)通过应用切向流过滤浓缩i)中提供的所述溶液；

iii)在切向流过滤结束之后通过过滤移除所述聚合免疫球蛋白，并且由此获得浓缩的免疫球蛋白溶液；

其中，在步骤ii)之后，所述免疫球蛋白的所述聚合可溶形式的份额比所述第一个值更大，并且比第二个值更小，其中该第二个值是第一个值的1.25倍。

2.通过切向流过滤获得浓缩的免疫球蛋白溶液的方法，特征在于所述的方法包括以下步骤：

i)提供待浓缩的含有免疫球蛋白的溶液，其中所述的免疫球蛋白以单体形式和聚合形式存在于所述溶液中，当通过尺寸排阻色谱法测定时，存在于所提供的溶液中的聚合可溶免疫球蛋白形式的份额超过2.5％，通过光遮蔽测定在所述溶液中具有第一个数目的大小超过1μm的颗粒；

ii)通过应用具有3.0巴恒定Δp的切向流过滤浓缩i)中提供的所述溶液，由此获得浓缩的免疫球蛋白溶液，通过光遮蔽测定在所述溶液中具有第二个数目的大小超过1μm的颗粒；

其中大小超过1μm的颗粒的所述第二个数目小于大小超过1μm的颗粒的所述第一个数目的200倍。

3.生产异源免疫球蛋白的方法，其包括以下步骤：

a)提供重组哺乳动物细胞，其包含一种或多种编码异源免疫球蛋白的核酸；

b)在适于表达该异源免疫球蛋白的条件下培养所述细胞；

c)从重组哺乳动物细胞或培养基中回收异源免疫球蛋白；

d)应用具有3.0巴恒定Δp的切向流过滤方法浓缩所获得的包含异源免疫球蛋白的水性、缓冲溶液，其中当通过光遮蔽测定颗粒数目时，在所述浓缩的溶液中大小超过1μm的颗粒的数目小于浓缩前的溶液中大小超过1μm的颗粒的数目的200倍。

4.从免疫球蛋白溶液移除免疫球蛋白聚集体的方法，特征在于所述方法包括以下步骤：

i)提供待浓缩的含有所述免疫球蛋白的溶液，其中所述的免疫球蛋白以单体形式和聚合形式存在于所述溶液中，或

提供待浓缩的含有免疫球蛋白的溶液，其中在所述溶液中通过加热诱导所述聚合形式的免疫球蛋白的形成，

ii)通过应用具有3.0巴的恒定Δp、以及0.6巴的恒定跨膜压力的切向流过滤方法浓缩i)中提供的所述溶液，

iii)通过用0.2μm孔径的滤器过滤从步骤ii)中获得的免疫球蛋白溶液移除免疫球蛋白聚集体，

其中当通过光遮蔽测定颗粒数目时，步骤ii)的所述浓缩的溶液中大小超过1μm的颗粒的数目小于浓缩前的溶液中大小超过1μm的颗粒的数目的200倍。

5.在用切向流过滤的浓缩步骤期间减少聚合可溶形式的免疫球蛋白形成的方法，其中通过在开始该浓缩步骤之前添加、补充或产生聚合可溶形式的免疫球蛋白而实现所述减少。

6.权利要求2-4任一项的方法，特征在于当通过光遮蔽测定颗粒数目时，在所述浓缩的溶液中大小超过5μm的颗粒的数目小于浓缩前的溶液中大小超过5μm的颗粒数目的100倍。

7.前述权利要求任一项的方法，特征在于当以所述溶液的尺寸排阻色谱图中的单体免疫球蛋白峰之前的洗脱峰曲线下面积测定时，所述聚合可溶免疫球蛋白形式的份额超过5％。

8.权利要求3的方法，特征在于其在步骤d)之前或步骤d)之后包括以下步骤：

e)纯化含有异源免疫球蛋白的水性、缓冲溶液。

9.前述权利要求任一项的方法，特征在于所述异源免疫球蛋白是完全免疫球蛋白、或免疫球蛋白片段、或免疫球蛋白缀合物。

10.权利要求3-8任一项的方法，特征在于所述哺乳动物细胞是CHO细胞、BHK细胞或细胞。

11.权利要求2-10任一项的方法，特征在于通过光遮蔽的测定在90mg/ml的蛋白质浓度下进行。