[发明专利]免疫球蛋白聚集体

说明书

本发明属于蛋白质浓缩领域，更具体而言，其涉及切向流过滤(TFF)用于免疫球蛋白浓缩和免疫球蛋白聚集体移除的应用。

背景技术

蛋白质、尤其是免疫球蛋白在当前的医药事务中起着非常重要的作用。用于生产重组多肽的表达系统是本领域公知的并且描述于，例如Marino，M.H.，Biopharm.2(1989)18-33；Goeddel，D.V.等，Methods Enzymol.185(1990)3-7；Wurm，F.和Bernard，A.，Curr.Opin.Biotechnol.10(1999)156-159。在制药应用中使用的多肽主要在诸如CHO细胞、NS0细胞、Sp2/0细胞、COS细胞、HEK细胞、BHK细胞、细胞等的哺乳动物细胞中生产。

对于人类应用，每种药用物质都必须符合特定的标准。为确保生物药用物质对人类的安全性，例如，必须移除可能造成严重伤害的核酸、病毒和宿主细胞蛋白质。为符合质量管理规格标准，在生产步骤之后必须有一个或多个纯化步骤。除其它因素外，纯度、生产能力和收率在确定合适的纯化方法中起着重要的作用。

由于它们的化学和物理性质，诸如分子量和结构域构造(包括二级修饰)，免疫球蛋白的下游加工非常复杂。例如，不仅对于配制的药物，而且对于下游加工(DSP)的中间产品，都需要浓缩溶液以实现经济性处理和应用贮存的低体积。此外，快速的浓缩方法对于确保顺利加工和短的操作时间都是有利的。就此方面，不完善的切向流过滤(TFF)方法(尤其是最终纯化步骤后的)可能引起持久的损害，甚至影响最终的药物产品。Ahrer，K.，等(J.Membr.Sci.274(2006)108-115)研究了单克隆抗体(mAb)中间溶液的切向流浓缩过程中切变应力和聚集之间的关系。监测了选择确定的流和压力参数对可缩放(scalable)方法性能的影响(例如，参见Dosmar，M.等，Bioprocess Int.3(2005)40-50；Luo，R.等，Bioprocess Int.4(2006)44-46)。Mahler，H.-C.等(Eur.J.Pharmaceut.Biopharmaceut.59(2005)407-417)报道了在通过不同的搅拌应力方法形成的液体IgG1-抗体制剂中聚集体的诱导和分析。在US 6,252,055中，报道了浓缩的单克隆抗体制备物。用于生产浓缩抗体制备物的方法报道于US 2006/0182740。US 2006/0051347报道了包括超滤、渗滤和二次超滤序列的联合方法。在EP 0 907 378中报道了应用具有250ml/分钟的固定再循环速率的横向流(cross-flow)超滤浓缩抗体制备物的方法。

发明概述

本发明的一个方面是通过切向流过滤获得浓缩的免疫球蛋白溶液的方法，特征在于所述的方法包括以下步骤：

i)提供待浓缩的含有免疫球蛋白的溶液，其中所述的免疫球蛋白以单体形式和聚合形式存在于所述溶液中，当通过尺寸排阻色谱法测定时，存在于所提供的溶液中的聚合可溶免疫球蛋白形式的份额(fraction)具有超过2.5％的第一个值；

ii)通过应用切向流过滤浓缩i)中提供的所述溶液；

iii)在切向流过滤结束后通过过滤移除所述聚合的免疫球蛋白，并且由此获得浓缩的免疫球蛋白溶液；

其中，步骤ii)之后，所述免疫球蛋白的所述聚合可溶形式的份额比所述第一个值更大，并且比第二个值要小，其中所述的第二个值是第一个值的1.25倍。

本发明的另一方面是通过切向流过滤获得浓缩的免疫球蛋白溶液的方法，特征在于所述的方法包括以下步骤：

i)提供待浓缩的含有免疫球蛋白的溶液，其中所述的免疫球蛋白以单体形式和聚合形式存在于所述溶液中，当通过尺寸排阻色谱法测定时，存在于所提供的溶液中的聚合可溶免疫球蛋白形式的份额超过2.5％，通过光遮蔽测定在所述溶液中具有第一个数目的大小超过1μm的颗粒；

ii)通过应用具有3.0巴恒定Δp的切向流过滤浓缩i)中提供的所述溶液，由此获得浓缩的免疫球蛋白溶液，通过光遮蔽测定在所述溶液中具有第二个数目的大小超过1μm的颗粒；

其中大小超过1μm的颗粒的所述第二个数目小于大小超过1μm的颗粒的所述第一个数目的200倍。

本发明的另一方面是生产异源免疫球蛋白的方法，其包括以下步骤：

a)提供重组哺乳动物细胞，其包含一种或多种编码异源免疫球蛋白的核酸；

b)在适于表达该异源免疫球蛋白的条件下培养所述细胞；

c)从重组哺乳动物细胞或培养基中回收异源免疫球蛋白；