[发明专利]用于生成树突细胞的方法

权利要求书

1.包含部分成熟的树突细胞的药物制剂，其通过包括下列步骤的方法可获得：

a)提供未成熟的树突细胞或其前体细胞或部分成熟的树突细胞，所述部分成熟的树突细胞如下可获得，即使未成熟的树突细胞与至少一种树突细胞成熟剂接触来生成部分成熟的树突细胞(半成熟的DC，smDC)，如以其分泌IL-12的能力所定义的，

b)操作步骤a)的所述细胞，特别是步骤a)的释放IL-12的所述部分成熟的树突细胞(半成熟的DC，smDC)，以便

(i)过表达能够使以连续的IL-12分泌表征的树突细胞的T淋巴细胞刺激能力维持至少24小时，优选至少48小时，且选自CD40L的至少一种免疫分子，其通过导入编码所述至少一种分子的核酸分子来实现；和/或

(ii)抑制或阻止在暴露于初级成熟剂诸如LPS/IFN-γ的树突细胞内起作用或自暴露于初级成熟剂诸如LPS/IFN-γ的树突细胞释放，并且选自白介素10(IL-10)和吲哚胺2，3-加双氧酶(IDO)的至少一种T-淋巴细胞抑制分子，诸如表3、4和/或5中给出的至少一种基因的表达，其如下实现，即敲除编码所述至少一种T-淋巴细胞抑制分子的基因或其片段或导入用以抑制或阻止在所述树突细胞内有活性或从所述树突细胞投递至T细胞的至少一种T-淋巴细胞抑制分子的表达的核酸分子，优选核糖核酸分子，并

c)任选地，添加物质来将树突细胞的前体细胞转化成树突细胞。

2.依照权利要求1的制剂，其特征在于所述未成熟树突细胞的前体，特别是单核细胞或造血干细胞，或所述未成熟的树突细胞获自皮肤、脾、骨髓、胸腺、淋巴结、脐带血、或外周血。

3.依照权利要求1或2的制剂，其特征在于所述至少一种树突细胞成熟剂选自下组：TLR激动剂诸如热灭活的或经福尔马林处理的卡介苗(BCG)，优选BCG的细胞壁成分、BCG衍生的脂阿拉伯甘露聚糖或BCG成分，自大肠杆菌衍生的脂多糖(LPS)、或灭活的革兰氏阳性或革兰氏阴性微生物、咪唑喹啉化合物，优选咪唑喹啉-4-胺化合物，特别是4-氨基-2-乙氧基甲基-x-二甲基-1H-咪唑[4，5-c]喹啉-1-乙醇或1-(2-甲基丙基)-1H-咪唑[4，5-c]喹啉-4-胺，或其衍生物，合成的双链多核糖核苷酸，优选多聚I:C、天然的双链RNA或RNA病毒或RNA片段、或合成的类似物、或包含未甲基化的CpG基序的合成的或天然的核酸分子、细胞因子组合，优选肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-1、IL-6或前列腺素E6、CD40L，优选重组CD40L或包含CD40L域的融合蛋白，或遗传工程化改造成表达CD40L的原代细胞或细胞系，或在生理学上上调CD40L表达的活化T淋巴细胞诸如T淋巴细胞。

4.依照权利要求1至3任一项的制剂，其特征在于在所述操作步骤b)前，使所述未成熟的树突细胞与所述至少一种树突细胞成熟剂接触至少2小时，优选至少4小时，更优选至少6小时，特别是至少12小时，最多24小时，以便给出部分成熟的树突细胞。

5.依照权利要求1至4任一项的制剂，其特征在于所述未成熟的或所述部分成熟的树突细胞加载有至少一种抗原。

6.依照权利要求5的制剂，其特征在于所述至少一种抗原选自下组：

a)肿瘤抗原、病毒抗原、细菌抗原、或任何其它人微生物或寄生物病原体；或

b)引起变态反应的环境抗原、启动的免疫应答所针对的且引起疾病的自身抗原、或移植抗原。