[发明专利]流感吸附疫苗的试验

说明书

技术领域

本发明涉及对流感疫苗，特别是其中抗原吸附于铝盐的疫苗进行试验的领域。

背景技术

目前有各种形式的流感病毒疫苗可用(参见，例如参考文献1的第17和18章)。疫苗通常基于活病毒或灭活病毒。灭活疫苗可基于完整的病毒粒子、“裂解”病毒粒子或纯化的表面抗原。

除诺华疫苗公司(Novartis Vaccines)的FLUAD^TM产品包含水包油乳液外，目前的流感疫苗不含佐剂。然而，佐剂已经用于实验性疫苗，其中铝盐用于多种场合，特别是用于针对流行毒株的疫苗。参考文献2-6利用氢氧化铝佐剂。参考文献7利用氢氧化铝和磷酸铝的混合物。参考文献8也描述了利用铝盐佐剂。

标准化流感疫苗的抗原含量的有用试验是WHO在1978年推荐的单向辐射状免疫扩散(SRID)试验以替代基于红细胞凝集的测试[9，10]。该试验基于流感抗原扩散入含有特异性抗-血凝素(抗-HA)血清的琼脂糖凝胶。随着抗原向外扩散，其遇到凝胶中的同源抗体，从而首先形成可见的沉淀物，例如围绕孔的圆晕。随着扩散继续，浓度朝着更多物质迁移，沉淀物溶解。扩散进一步继续直至抗原的浓度降低，从而能再次沉淀。进一步扩散造成沉淀、再溶解和再沉淀，直至抗原太少从而不能再溶解沉淀物的边缘。如此圆晕的直径停止增加。最终圆晕的直径与制品中HA抗原的含量直接成比例。通过比较未知制品产生的圆晕与HA含量已知参比制品的圆晕，可测定未知制品的抗原含量。

参考文献5通过就在使用前临时混合抗原和佐剂来制备含佐剂的疫苗。因此，能在引入佐剂之前标准化抗原含量。然而，如果在散装(bulk)疫苗生产阶段混合抗原和佐剂，必须对吸附的抗原实施SRID试验。本发明人发现流感HA与铝盐佐剂极其牢固，从而不能良好扩散入SRID凝胶，因此不易采用标准方法直接测定。因此需要改进SRID试验以便用于预吸附的疫苗。

发明内容

本发明通过纳入先解吸抗原再扩散的步骤而改进了吸附抗原的流感SRID试验方案。因此，本发明提供进行SRID试验的方法，包括以下步骤：

(a)获得包含感兴趣抗原的起始组合物，其中所述抗原吸附于佐剂；

(b)处理该起始组合物以使抗原与佐剂解吸；和

(c)使解吸的组合物或其样品扩散入含有感兴趣抗原的特异性抗体的凝胶。

本发明还改进了佐剂吸附抗原的SRID试验，包括先使抗原解吸再进行抗原径向扩散。

更具体地说，先采用解吸步骤再进行受吸附干扰的任何流感疫苗分析步骤，例如包括SDS-PAGE、免疫印迹或蛋白质印迹、免疫测定(例如，ELISA)、BCA蛋白质试验等在内的试验技术。因此，本发明提供对流感抗原实施的方法，包括以下步骤：

(a)获得包含流感抗原的起始组合物，其中所述抗原吸附于佐剂；

(b)处理该起始组合物以使抗原与佐剂解吸；和

(c)将某种试验技术应用于该解吸组合物或其样品。

本发明还改进了佐剂吸附流感抗原的试验，包括先使抗原解吸再进行抗原测定。

本发明还提供采用本发明方法测定过的抗原组合物。本发明还提供包含采用本发明方法测定过的抗原的疫苗。

SRID试验

本发明的SRID试验包括上述(a)-(c)三步。

要用SRID试验分析的起始组合物包含吸附于佐剂的抗原。抗原通常是下文详述的流感病毒抗原，但也知道SRID试验可用于测定其它疫苗的效力，包括灭活的脊髓灰质炎和狂犬病疫苗[9，10]。可根据所测定的抗原选择凝胶中包含的抗体。

吸附抗原的佐剂通常是下文详述的不可溶金属盐。

SRID试验通常包括将待分析的组合物引入凝胶孔中。该孔通常是圆形，因此步骤(c)中的扩散基本上是径向的。在本发明试验中，吸附的抗原与佐剂解吸从而能扩散入凝胶。解吸的其它细节见下文。

解吸可在凝胶孔内发生，但通常发生在将抗原组合物加入孔中之前。因此，在步骤(b)和(c)之间，本发明方法可包括将解吸组合物或其样品引入含有感兴趣抗原的特异性抗体的凝胶的步骤。

典型SRID试验所用凝胶包含多个孔以便接收样品，进行平行分析。常在一次试验中测试同一材料的多份样品，通常采用不同的样品稀释度。本发明方法可将一份样品的抗原解吸，然后划分该样品再进行免疫扩散，在此情况中，先将步骤(b)的解吸抗原分成多份样品再进行步骤(c)。