[发明专利]神经突增生做为增强记忆化合物的测定法

权利要求书

1.一种鉴定增强记忆的化合物的方法，包含：从文库中选择诱导神经突增生并且也增强CREB途径功能的候选化合物，从而将既诱导神经突增生又增强CREB途径功能的化合物鉴定为增强记忆的化合物。

2.权利要求1的方法，其中选择诱导神经突增生的候选化合物的步骤包含：

a)将候选化合物或者对照化合物提供给神经突宿主细胞；

b)测定细胞生长对候选化合物和对照化合物的反应；以及

c)观察候选化合物和对照化合物之间细胞生长的差异；从而将在细胞生长中导致阳性变化的候选化合物鉴定为增强神经突增生的化合物。

3.权利要求2的方法，其中所述神经突宿主细胞是Neuroscreen 1细胞。

4.权利要求2的方法，其中所述神经突宿主细胞是小鼠海马神经元。

5.权利要求2的方法，其中所述神经突宿主细胞是成神经细胞瘤Neuro2a细胞。

6.权利要求2的方法，其中所述宿主细胞进一步包含CREB报道构建物。

7.权利要求6的方法，其中所述候选化合物也上调CREB报道构建物。

8.权利要求1的方法，其中选择增强CREB途径功能的候选化合物的步骤包含：

a)使包含可操纵地连接于CRE启动子的指示基因的宿主细胞与候选化合物接触，从而产生测试样品；

b)使该测试样品与亚适量的CREB功能刺激剂接触；

c)确定已经接触了所述测试化合物和所述CREB功能刺激剂的所述宿主细胞中的指示物活性；

d)将上述指示物活性和已经接触了所述CREB功能刺激剂而未接触所述测试化合物的对照细胞中的指示物活性进行比较；以及

e)如果：1)相对于接触了所述CREB功能刺激剂而未接触所述测试化合物的所述对照细胞内的指示物活性，步骤c)中确定的指示物活性升高；以及2)相对于未接触所述CREB功能刺激剂和未接触所述测试化合物的对照细胞中的指示物活性，未接触所述CREB功能刺激剂而接触了所述测试化合物的对照细胞内的指示物活性没有显著不同，则选择所述测试化合物。

9.权利要求8的方法，进一步包含步骤：

使用步骤e)中选择的所述测试化合物的一个范围的不同浓度来重复步骤a)到e)的步骤；

g)如果：1)相对于已经接触了所述CREB功能刺激剂而未接触所述测试化合物的所述对照细胞内的指示物活性，所述范围的不同浓度的所述测试化合物的指示物活性升高；以及2)相对于未接触所述CREB途径功能刺激剂和未接触所述测试化合物的对照细胞内的指示物活性，未接触所述CREB功能刺激剂而引入了所述范围的不同浓度的所述测试化合物的对照细胞内的指示物活性没有显著不同，则选择所述测试化合物，从而选择候选化合物；

h)使神经来源的细胞与步骤g)中选择的所述候选化合物以及与亚适量的CREB功能刺激剂进行接触；

i)评估与所述候选化合物和所述CREB功能刺激剂接触的细胞内的内源CREB依赖性基因表达；

j)将步骤i)中评估的内源CREB依赖性基因表达与已经接触了所述CREB功能刺激剂而未接触所述候选化合物的对照细胞中的内源CREB依赖性基因表达进行比较；

k)如果：1)相对于已经接触了所述CREB功能刺激剂而未接触所述候选化合物的对照细胞中的内源CREB依赖性基因表达，步骤i)中评估的内源CREB依赖性基因表达升高；和2)相对于未接触所述CREB功能刺激剂和未接触所述候选化合物的对照细胞内的CREB依赖性基因表达，未接触所述CREB功能刺激剂而接触了所述候选化合物的对照细胞内的内源CREB依赖性基因表达没有显著不同，则选择所述候选化合物，从而选出经确认的候选化合物；

l)将步骤k)中选出的经确认候选化合物施用给动物；

m)在适合于在所述动物中产生长期记忆形成的条件下，对施用了所述经确认的候选化合物的所述动物进行训练；

n)评估步骤m)中训练的所述动物中的长期记忆形成；和

o)将步骤n)中评估的长期记忆形成与未被施用所述经确认的候选化合物的对照动物中所产生的长期记忆形成进行对比。

10.权利要求9的方法，其中所述宿主细胞是人成神经细胞瘤细胞以及所述神经来源的细胞是神经元。