[发明专利]神经突增生做为增强记忆化合物的测定法

说明书

相关申请

本申请要求2007年12月27日提交的美国临时申请NO.61/017,134的优先权，通过引用将其全部内容并入本文。

技术领域

本发明涉及使用神经突增生(neurite outgrowth)测定作为增强和改善记忆功能化合物的筛选法。

背景技术

日益增长的证据表明成年的大脑中神经元仍继续增生(Arsenijevic，Y.等，Exp.Neurol.，170：48-62(2001)；Vescovi，A.L等，Biomed.Pharmacother.，55：201-205(2001)；Cameron，H.A.和McKay，R.D.，J.Comp.Neurol，435：406-417(2001)；以及Geuna，S等，Anat.Rec.，265：132-141(2001))。目前进行中的实验策略是将神经元干细胞移植到成年大脑中用于多种治疗适应征(Kurimoto，Y等，Neurosci.Lett.，306：57-60(2001)；Singh，G.，Neuropathology，21：110-114(2001)和Cameron，H.A.和McKay，R.D.，Nat.Neurosci.，2：894-897(1999))。对于发育胚胎期的神经发生已经了解了很多(Saitoe，M.和Tully，T。，“Making Connection between synaptic and behavioralplasticity in Drosophila”，In Toward a Theory of Neuroplasticity，J McEachemand C.Shaw，Eds(New York：Psychology Press)，pp.193-220(2000))。神经元分化，神经轴延伸和初始突触靶标识别，看起来均以活性非依赖性的形式发生。

无论在成年人还是在年轻人中，起改善学习和记忆作用的化合物会在市场中得到迅速的接受和使用。

本申请探索了增强神经突增生及其对记忆的作用的化合物的交集。

发明概述

长期记忆可以用刺激CREB途径活性和增强神经突增生的化合物来进行增强。本发明的一个实施方案涉及鉴定增强记忆的化合物的方法，包含：从文库中选择诱导神经突增生并且也增强CREB途径功能的候选化合物，其中既促进神经突增生又增强CREB途径功能的化合物被鉴定为增强记忆的化合物。选择诱导神经突增生的候选化合物的步骤包括，向神经突宿主细胞提供候选化合物或对照化合物；测试细胞生长对候选化合物和对照化合物的反应；以及观察候选化合物和对照化合物之间的细胞生长差异；其中导致细胞生长中的阳性变化的候选化合物被鉴定为增强神经突增生的化合物。该方法中使用的神经突宿主细胞可以是Neuroscreen 1细胞，小鼠海马神经元，或成神经细胞瘤Neuro2a细胞。该宿主细胞可以进一步包含CREB报道构建物，并且候选化合物也上调CREB报道构建物。

在实施方案的一个方面，选择增强CREB途径功能的候选化合物的步骤包含：使包含可操纵地连接于CRE启动子的指示基因的宿主细胞与候选化合物进行接触，从而产生测试样品；使该测试样品与亚适量的CREB功能刺激剂接触；确定已经与所述测试化合物和所述CREB功能刺激剂接触的所述宿主细胞内的指示物活性；将该指示物活性和对照细胞内的指示物活性进行比较，所述对照细胞已经接触了所述CREB功能刺激剂而未接触所述测试化合物；如果1)相对于接触了所述CREB功能刺激剂而未接触所述测试化合物的所述对照细胞内的指示物活性，步骤c)中所确定的指示物活性升高；以及2)相对于未接触所述CREB功能刺激剂和未接触所述测试化合物的对照细胞中的指示物活性，未接触所述CREB功能刺激剂而接触了所述测试化合物的对照细胞内的指示物活性没有显著不同，则选择所述测试化合物。