[发明专利]抗MIF抗体

说明书

技术领域

本发明涉及单克隆抗体和其抗原结合部分，其可特异性地结合至巨噬细胞游走抑制因子(MIF)的C末端或者中心区域。这些抗MIF抗体和其抗原结合部分进一步地抑制人MIF的生物功能。本发明也涉及来源于抗MIF抗体的被分离的免疫球蛋白重链和轻链以及编码这些免疫球蛋白的核酸分子。本发明也涉及识别抗MIF抗体的方法、含有这些抗体的组合物以及使用这些抗体和组合物用于治疗MIF相关疾病的方法。

背景技术

巨噬细胞游走抑制因子(MIF)最初是基于能够抑制巨噬细胞体外随意移动的能力而被分离的细胞因子(Bloom等人，Science 1966，153，80-2；David等人，PNAS 1966，56，72-7)。虽然自从1966年人们已经知道MIF，但是并不知道它在大多数细胞中准确的功能，然而MIF似乎是天生的和获得性免疫反应的关键的上游调节剂。

在1989年，人MIF的cDNA被克隆(Weiser等人，PNAS 1989，86，7522-6)，并且它的基因组定位在染色体22上。MIF基因产物是分子量为12.5kDa的氨基酸蛋白。此蛋白在人、小鼠、大鼠和牛的MIF之间的序列同源性上是高度保守的，同源性为90-96％。然而，MIF与其他任何蛋白没有显著的序列同源性。MIF的三维结构不像任何其他的细胞因子或者脑垂体激素。蛋白结晶成相同亚基的三聚体。每个单体包含两个反向平行的α-螺旋，α-螺旋堆集成有四条链的β-折叠。该单体有另外两个β-链，它们与相邻的亚基的β-折叠相互作用形成单体之间的交界面。三个β-折叠排列形成桶，该桶含有溶剂可到达的通道，此通道沿着分子的三折叠轴穿过蛋白的中心(Sun等人，PNAS 1996，93，5191-5196)。

已经有报导称很低浓度的糖皮质激素就可以诱导巨噬细胞分泌MIF(Calandra等人，Nature 1995，377，68-71)。然而，作为促炎细胞因子(proinflammatory cytokine)，MIF也可也反向调节糖皮质激素的作用并刺激其它细胞因子如肿瘤坏死因子TNF-α和白介素IL-1β的分泌(Baugh等人，Crit Care Med 2002，30，S27-35)，从而假定在炎性和免疫性疾病的发病机理上的作用。MIF也与淋巴瘤、黑素瘤和结肠癌的生长直接相关(Nishihira等人，J Interferon Cytokine Res.2000，20：751-62)。

MIF是许多病理状况的中介体，因此与多种疾病相关联，包括炎症性肠病(IBD)、类风湿性关节炎(RA)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、哮喘、肾小球肾炎、IgA肾小球肾炎、癌症、心肌梗死(MI)和脓毒。

多克隆和单克隆抗MIF抗体已经被开发用来对抗重组人MIF(Shimizu等人，FEBSLett.1996；381，199-202；Kawaguchi等人，J.Leukoc.Biol.1986，39，223-232，and Weiser等人，Cell.Immunol.1985，90，167-78)。

已经有人建议，抗MIF抗体可用于抑制TNF-α释放的治疗应用。Calandra等人(J.Inflamm.1995.47，39-51)报导使用抗MIF抗体可以保护动物免予实验诱导的革兰氏阴性和革兰氏阳性的败血性休克。表明抗MIF抗体作为一种治疗方法可用来调节在败血性休克及其他炎性疾病状态下的细胞因子的产生。

美国专利6,645,493公开了来源于杂交瘤细胞的单克隆抗MIF抗体，它压制了MIF的生物活性。在动物模型中可以看到这些来源于小鼠的抗MIF抗体在内毒素诱导的休克的治疗上取得了有益效果。一些被描述的抗MIF抗体(III.D.9，XIV.14.3和XIV.15.5)在本发明中被用于比较试验。

美国专利2003/0235584公开了在动物中制备MIF的高亲和性抗体的方法，其中MIF基因已经被纯合地敲除。

Galat等人描述了糖基化抑制因子(GIF)蛋白(Eur.J.Biochem.1994，224，417-21)。MIF和GIF现在被认为是相同的。Watarai等人(PNAS 2000，97，13251-6)描述了与不同GIF抗原表位相结合的多克隆抗体以便确定Ts细胞中GIF翻译后修饰的生物化学本质。Watarai等人(PNAS 2000，97，13251-6)报导了体外GIF出现的不同构象同工型。一种类型的异构体是通过单个半胱氨酸残基的化学修饰而生成的。该化学修饰导致了GIF蛋白内部的构象变化并改变了它的生物功能。