[发明专利]用于治疗结核病的有效的新药物靶标

权利要求书

1.体外筛选通过干扰阿拉伯半乳聚糖生物合成来治疗结核病之候选药物的方法，所述方法包括将过表达使十聚异戊二烯磷酸核糖转化为十聚异戊二烯磷酸阿拉伯糖之蛋白质的结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis)细胞培养物与候选药物相接触，所述蛋白质可由rv3790基因或其同源物或者其基因产物与Rv3790蛋白相同或同源之任意人工开放读码框所编码，然后评价在测定试验中由所述候选药物所引起的相比于对照的抑制百分数。

2.根据权利要求1的筛选方法，其中所述测定试验是体外抗细菌试验或酶促试验。

3.根据权利要求1或2的筛选方法，其中所述过表达Rv3790的结核分枝杆菌细胞培养物通过用pSODIT-2/Rv3790转化结核分枝杆菌细胞培养物而获得。

4.根据权利要求1至3中任一项的筛选方法，其中抑制百分数的评价通过测定所述候选药物的最低抑制浓度(MIC)来进行。

5.根据权利要求4的筛选方法，其中使用两种或更多种药物浓度以便计算每种候选药物的所述MIC。

6.根据权利要求1至5中任一项的筛选方法，其中还利用仅转化pSODIT-2载体的结核分枝杆菌细胞培养物来测试每种候选药物。

7.根据权利要求1至6中任一项的筛选方法，其中所述对照是异烟肼。

8.根据权利要求1至7中任一项的筛选方法，其中还进行另一对照实验，其中不用候选药物进行处理，从而得到0％的抑制，并且其中相对于所述另一对照来评价利用所述候选药物得到的抑制百分数。

9.根据权利要求1至8中任一项的筛选方法，其中所述将过表达Rv3790的结核分枝杆菌细胞培养物与候选药物相接触的步骤可通过将所述细胞制备物铺板于包含不同浓度所述候选药物的合适培养基上来实施。

10.根据权利要求9的筛选方法，其中所述培养基是Middlebrook7H11固体培养基(Difco提供)。

11.根据权利要求10的筛选方法，其中所述培养基添加有油酸、牛血清白蛋白、右旋糖和过氧化氢酶(OADC)。

12.根据权利要求2的筛选方法，所述测定试验是酶促试验，其包括将候选药物与包含FAD、NAD⁺、NADPH和经放射性标记的十聚异戊二烯磷酸核糖(DPR)的反应混合物中的重组Rv3790酶相接触的步骤，然后评价相对于对照来说由所述候选药物所引起的对产生十聚异戊二烯磷酸-D-阿拉伯糖(DPA)之酶促反应的抑制百分数。

13.根据权利要求1至12中任一项的筛选方法，其还包括对通过体外试验的候选药物的体内筛选评价，所述体内评价包括向具有血源播散型结核病菌株的小鼠施用预选给药方案，并与对照药物和安慰剂进行比较。

14.根据权利要求13的筛选方法，其中所述对照药物是异烟肼。

15.根据权利要求13或14的筛选方法，其中使用BALB/C小鼠。

16.根据权利要求13至15中任一项的筛选方法，其中所述结核病菌株是结核分枝杆菌H37Rv的毒性培养物。

17.鉴定患者中抗药性分枝杆菌菌株的诊断方法，该方法包括通过聚合酶链式反应扩增从结核病患者中分离的结核分枝杆菌菌株rv3790基因，并分析该DNA序列中是否存在造成对苯并噻嗪酮之抗性的经鉴定突变。

18.根据权利要求17的诊断方法，其中所述经鉴定突变是第387密码子处的半胱氨酸突变为甘氨酸、或半胱氨酸突变为丝氨酸。

19.能通过本发明筛选方法获得的Rv3790蛋白的抑制剂，其中这样的抑制剂选自苯并噻嗪酮或代谢产生苯并噻嗪酮的分子、抗Rv3790蛋白质的单克隆抗体、rv3790基因的反义RNA序列或包含Rv3790蛋白的疫苗。

20.根据权利要求19的抑制剂，所述抑制剂是能由rv3790mRNA序列的25聚体序列获得的反义RNA序列。

21.根据权利要求20的抑制剂，其中所述序列是SEQ ID NO.1：AUGUUG AGC GUG GGA GCU ACC ACU A。