[发明专利]一种耐热非-K12大肠杆菌植酸酶及其生产

权利要求书

1.一个分离的核酸分子，其含有一个选自以下组中的核苷酸序列：

(a)一个核苷酸序列，其编码如SEQ ID NO：3所示氨基酸序列的多肽；

(b)一个在严格杂交条件下与(a)杂交的核苷酸序列，其所述核苷酸序列编码具有非-K12大肠杆菌植酸酶活性的多肽；或

(c)一个与(a)或(b)互补的核苷酸序列。

2.如权利要求1所述的分离的核酸分子，其含有一个选自以下组中的核苷酸序列：

(a)一个由如SEQ ID NO：1中所示第67-1296位核苷酸所组成的核素序列；

(b)一个由如SEQ ID NO：2中所示第1-1230位核苷酸所组成的核素序列；

(c)一个如SEQ ID NO：1所示的核酸序列；

(d)一个在严格杂交条件下与(a)至(c)中任一个杂交的核酸序列，其编码具有非-K12大肠杆菌植酸酶活性的多肽；或

(e)一个与(a)至(d)中任一个互补的核苷酸序列。

3.一个含有如权利要求1中所述分离的核酸分子的载体。

4.如权利要求3所述的载体，其是一个表达载体。

5.如权利要求4所述的载体，其可以从由pTrcHis2-PhE，pPIC9K-PhE，pMET-PhE和pKLAC-PhE所组成的组中选取。

6.一个含有如权利要求1所述的分离的核酸分子的细胞；

7.如权利要求6所述的细胞，其所述的分离的核酸分子包含在一个表达载体上。

8.如权利要求6所述的细胞，其是一个酵母细胞。

9.如权利要求6所述的细胞，其可以从由大肠杆菌(Escherichia coli.)、巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)、甲醇酵母(Pichia methanolica)和克鲁维乳酸酵母(Kluyeromyces lactis)所组成的组中选取。

10.如权利要求6所述的细胞，其可以选自以下组中：E.coli MG1655，P.pastoris GS115，P.methanolica PMAD16和Kluyeromyces lactis GG799。

11.如权利要求6所述的细胞，其可以选自以下组中：转化有pTrcHis2-PhE载体的E.coli MG1655细胞，转化有pPIC9K-PhE载体的P.pastoris SMD1168细胞，转化有pMET-PhE载体的P.methanolica PMD16细胞和转化有pKLAC-PhE载体的Kluyeromyces lactis GG799细胞。

12.一个多肽，其含有一个选自以下组中的氨基酸序列：

(a)一个如SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列；或

(b)一个与SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列的相似性99％以上的氨基酸序列，其所述的多肽具有非-K12大肠杆菌植酸酶活性。

13.一个通过发酵生产非K-12大肠杆菌植酸酶的工艺，其包括在一个有利于表达的条件下培养如权利要求6所述的细胞，以获得具有非-K12大肠杆菌植酸酶活性的多肽。优选的，所选择的细胞株为转化有pTrcHis2-PhE载体的E.coli MG1655细胞，转化有pPIC9K-PhE载体的P.pastoris SMD1168细胞，转化有pMET-PhE载体的P.methanolicaPMD16细胞和转化有pKLAC-PhE载体的Kluyeromyces lactis GG799细胞。