[发明专利]应用真菌诱导龙血树产生血竭的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体地说涉及一种利用真菌诱导龙血树产生血竭的方法。

背景技术

血竭(dragon’s blood)是一种深红色树脂，自古代已作为著名的传统药材用于许多国家。在临床上主要用于促进血液循环，治疗创伤、炎症、痢疾和糖尿病。据文献报道，目前市场上的血竭主要来源于4科5属23种植物。在中国，上世纪70年代，蔡希陶先生在云南省发现了剑叶龙血树[Dracaena cochinchinensis(Lour.)S.C.Chen]的红色树脂可替代进口血竭使用，彻底改变了血竭长期进口的历史。后续又在海南省发现了国产龙血竭(Chinesedragon’s blood)的另一基源植物小花龙血树(D.cambodiana Pierre ex Gagnep.)。

近年来，对国产血竭的需求量剧增，使得剑叶龙血树和小花龙血树野生资源的蕴藏量急剧下降，已被列为国家珍稀濒危保护植物。使得血竭的开发利用受到限制，因此广辟生产途径，解决血竭资源贫乏问题变得十分迫切。

目前研究表明血竭的形成与树体的损伤及镰刀菌属真菌的侵染有密切的关系。由此可见，真菌在血竭的产生过程中有举足轻重的作用。在自然环境条件下，血竭的产量不仅低，而且生产周期长。因此，人为的接种特定微生物有望提高血竭的产量，并大幅度缩短产生血竭的时间，也许是最有应用前景的途径之一。

发明内容

本发明的目的在于提供1株能够诱导龙血树产生血竭的真菌，该真菌是从龙血树的茎部分离得到的，它能促进活体龙血树树干和离体龙血树树干产生与血竭化学成分相似的红色物质。

本发明的又一目的在于提供一种应用真菌诱导龙血树产生血竭的方法，该方法工艺简单，生产成本低廉，生产周期短，充分地利用和保护了龙血树资源，便于推广应用，解决血竭药用资源紧张的问题。

为实现上述目的，本发明采用的技术是先培养真菌，再将真菌接种到龙血树的树干上。经过一段时间后，在接种孔的周围会产生与血竭化学成分相似的红色物质。本发明采用的1株真菌经鉴定为镰孢属真菌D-22(Fusarium sp.)，保藏编号CGMCC No.2598，该菌株于2008年7月16日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏单位地址：北京市朝阳区大屯路甲3号，中国科学院微生物研究所。菌株的保藏和存活证明见附件。

真菌D-22的培养特性为：在PDA培养基上菌落为粉色，气生菌丝丝状，菌落背面为红褐色，分泌红褐色物质，生长1周菌落直径为5.2cm；小型分生孢子单胞，椭圆形，有时两端略弯曲，3.4-12.1×1.4-3.4μm；大型分生孢子，多胞，镰刀形，37.6×4.0μm，少见。

具体地说，本发明所述的技术步骤方法如下：

1.真菌的培养

将由龙血树茎部分离得到的保藏编号为CGMCC No.2598的真菌D-22自低温保藏的斜面试管菌种活化后，转接于PDA培养基的平皿中，恒温培养15-20天；或转接于PDA液体培养基或麦麸液体培养基中，恒温震荡培养5-15天，或转接于锯末麦麸固体培养基中，恒温培养20-50天；培养温度均为22-28℃。

将上述培养的菌种接种到含有锯末、树叶和麦麸的锯末复合固体培养基中进行培养，待菌丝长满培养基后直接使用。锯末复合固体培养基中锯末、树叶和麦麸的重量比为2∶1∶0.5；或将PDA平皿培养的菌种，在菌落边缘打孔成菌片，接入PDA液体培养基或麦麸液体培养基中，培养5-15天后取发酵物使用。

2.真菌的接种

选取树龄5年以上的剑叶龙血树或小花龙血树的树干或离体树干，通过钻孔的方式在树干形成直径0.5-3cm，深2-15cm的接种孔，或通过横向切割、或纵向切割、或从上向下斜向切割的方式，在树干形成长1-6cm，宽1-6cm，深1-6cm的接种槽。接种孔或接种槽的间隔是纵向间隔5-15cm，横向间隔3-10cm。在接种孔中接入锯末复合固体培养基培养的菌种或液体培养基培养的发酵物，在接种槽中接入锯末复合固体培养基培养的菌种。接种后用聚丙烯薄膜包扎接菌孔。经过3-10个月后，接种孔周围能产生与血竭化学成分相似的红色物质。

具体实施方式

实施例1

PDA培养基平皿中培养的真菌D-22接种在锯末复合固体培养基上生长30天，备用。

选取树龄为10年的小花龙血树，用直径为1cm的钻头在树干上钻孔9个，孔深为5-6cm，各个孔洞间的间隔均为10cm，其中3个孔洞中接入灭菌后的锯末复合固体培养基作为对照，其它6个孔洞中接入上述培养30天的真菌D-22，聚丙烯薄膜包扎接菌孔。