[发明专利]一种检测人乳头瘤病毒中和抗体的方法

权利要求书

1、高通量检测被HPV假病毒或病毒感染的细胞的方法，包括：(1)使被HPV假病毒或病毒感染的细胞带有适于斑点检测仪器(或，斑点检测法)检测的信号，但未被感染的细胞不带有该信号；和(2)通过使用斑点检测仪器(或，通过以斑点检测法)检测该信号来检测被HPV假病毒或病毒感染的细胞。

2、权利要求1的方法，用于被HPV假病毒或病毒感染的细胞的计数。

3、通过使样品中可能存在的人乳头瘤病毒中和抗体与人乳头瘤病毒假病毒或病毒接触以阻止人乳头瘤病毒假病毒或人乳头瘤病毒感染细胞(通常是培养细胞)，并检测被人乳头瘤病毒假病毒或人乳头瘤病毒感染的细胞，来检测样品中的人乳头瘤病毒中和抗体的方法，其特征在于：采用权利要求1或2的方法来检测被人乳头瘤病毒假病毒或人乳头瘤病毒感染的细胞。

4、权利要求3所述方法，其中所述样品为来自待检个体的分离的生物学样品，优选所述样品为血清；或来自组织培养的生物学样品。

5、权利要求3-4任一项所述方法，其中所述方法用于检测样品中人乳头瘤病毒中和抗体的存在与否和/或其效价。

6、权利要求1-5之任一项所述的方法，其中所述斑点检测法中检测数据是通过使用斑点检测仪器获得的，斑点检测仪器能够用于从细胞群体中分辨和测算产生特定信号(例如颜色)的细胞的数量，优选Elispot。

7、权利要求1-6之任一项所述的方法，其中使感染细胞产生能够被斑点检测仪器检测的信号是通过如下方法获得的：报告基因表达元件在感染细胞中表达产生报告蛋白，该报告蛋白可直接产生或间接(例如通过显色反应)产生能够被斑点检测仪器检测的信号。

8、权利要求7所述的方法，其中所述的报告基因在感染细胞中的表达是通过人乳头瘤病毒假病毒或病毒感染细胞实现的；报告基因表达元件可通过带有报告基因表达元件的人乳头瘤病毒假病毒感染细胞而导入细胞中表达，或者，也可通过人乳头瘤病毒假病毒或病毒感染带有报告基因表达元件的细胞后激活该报告基因表达元件表达，优选带有报告基因表达元件的人乳头瘤病毒假病毒的方式。

9、权利要求1-8之任一项所述的方法，其中所述的报告基因为其表达产物可以直接或间接导致产生能够被斑点检测仪器检测的信号的基因，如β半乳糖苷酶基因等。

10、权利要求1-9之任一项所述的方法，其包括以下步骤：

A)将细胞培养于固相培养载体(例如细胞培养皿、细胞培养板等，优选细胞培养板，更优选96孔细胞培养板)上，作为人乳头瘤病毒或人乳头瘤病毒假病毒感染的靶细胞；所述细胞为动物细胞，特别是哺乳动物细胞，也可是一种改造的细胞，其可在人乳头瘤病毒假病毒或人乳头瘤病毒感染后表达报告蛋白；

B)根据所需要检测的人乳头瘤病毒中和抗体所属的人乳头瘤病毒型别，准备需要的人乳头瘤病毒或人乳头瘤病毒假病毒，例如带有报告基因表达元件的人乳头瘤病毒假病毒；

其中，A)中所述的细胞在被B)中所述的人乳头瘤病毒或者人乳头瘤病毒假病毒感染后能够表达报告蛋白，该报告蛋白能直接产生或间接(例如通过显色反应)产生能够被斑点检测仪器检测的信号；

C)使待检测样品与步骤B)中所述的人乳头瘤病毒假病毒或人乳头瘤病毒接触，使得样品中的人乳头瘤病毒中和抗体，如果存在的话，会与人乳头瘤病毒假病毒或人乳头瘤病毒结合，从而能够阻止人乳头瘤病毒假病毒或人乳头瘤病毒对步骤A)中所述靶细胞的感染；该接触在允许样品中的中和抗体与人乳头瘤病毒假病毒或人乳头瘤病毒结合的条件下进行；

D)使步骤C)的产物(检测样品与人乳头瘤病毒假病毒或人乳头瘤病毒的混合液)和步骤A)的产物(培养于固相培养载体的细胞)接触，该接触在允许细胞正常生长的条件下进行；

E)应用斑点检测仪器(如Elispot)，通过检测带有由报告蛋白直接或间接产生的信号的细胞，检测被感染细胞的数量；

F)根据步骤E)获得的结果测算样品中是否有人乳头瘤病毒中和抗体和/或其效价。