[发明专利]一种利用三维荧光原位杂交检测单卵裂球中染色体的方法

权利要求书

1.利用三维荧光原位杂交检测单卵裂球中染色体的方法，是在体积为50微升以下的液滴环境中进行三维荧光原位杂交。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：

1)用多聚甲醛对单卵裂球进行固定；

2)将固定后的单卵裂球进行透膜处理；

3)将透膜处理后的单卵裂球进行去蛋白处理；

4)将去蛋白处理后的单卵裂球与探针进行杂交。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中，将单卵裂球在10微升-50微升的液滴A中进行固定；所述液滴A中含有体积百分含量为2％-4％的多聚甲醛。

4.如权利要求2或3所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中的透膜处理包括如下步骤：将单卵裂球依次置于10微升-50微升的液滴B、10微升-50微升的液滴C中进行处理；然后将单卵裂球在液氮中进行冻融；所述液滴B中含有体积百分含量为0.4％-1.0％的TritonX-100；所述液滴C中含有体积百分含量为15％-25％的甘油。

5.如权利要求2至4中任一所述的方法，其特征在于：所述步骤3)中的去蛋白处理包括如下步骤：将单卵裂球置于10微升-50微升的液滴D中进行处理；所述液滴D含有浓度为0.08-0.12M的HCl。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于：所述步骤3)还包括将单卵裂球置于液滴D中处理后，再在液滴D中加入甘油的步骤。

7.如权利要求2至6中任一所述的方法，其特征在于：所述步骤4)中探针的用量为0.05-0.08微升。

8.如权利要求2至7中任一所述的方法，其特征在于：所述方法在步骤4)后，还包括将杂交后的单卵裂球在10微升-50微升的液滴环境中进行洗脱的步骤。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于：所述洗脱为如下a)或b)的操作：

a)不移动单卵裂球，吸弃洗脱液进行洗脱；

b)在洗脱液中加入0.08％-0.12％NP-40/2*SSC，移动单卵裂球进行洗脱；

所述0.08％-0.12％NP-40/2*SSC是含有体积百分含量为0.08％-0.12％的NP-40的2*SSC。

10.权利要求1至9中任一所述方法在单卵裂球遗传检测中的应用。