[发明专利]含多角体基因的重组载体及其表达与纯化蛋白质的方法

权利要求书

1.一种重组质粒pBacPAKph，其特征在于：所述重组质粒为pBacPAK8质粒的EcoR V和BamH I双酶切小片段被一段核酸序列所替代的重组质粒，所述核酸序列由多角体启动子核酸序列、终止子被突变删除的多角体蛋白编码框序列和编码TEV蛋白酶酶切位点的核酸序列依次连接而成；

通过以下步骤制得：

（1）以家蚕杆状病毒DNA为模板，SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示序列为引物，通过PCR扩增反应，制得扩增产物；

（2）将步骤（1）制得的扩增产物EcoR V和BamH I双酶切克隆至pBacPAK8质粒，制得重组质粒pBacPAKph。

2.一种重组质粒pBacPAKph-M，其特征在于：所述重组质粒pBacPAKph-M为权利要求1所述重组质粒pBacPAKph的多克隆位点插入有目的蛋白基因M的重组质粒，其中所述目的蛋白基因M为家蚕膜蛋白基因。

3.一种保藏号为CGMCC No. 2768的线性化病毒重组子。

4.权利要求3所述保藏号为CGMCC No. 2768的线性化病毒重组子的制备方法，其特征在于：由权利要求3所述的重组质粒pBacPAKph-M与线性化BmBacPAK6病毒DNA同源重组制得。

5.权利要求3所述保藏号为CGMCC No. 2768的线性化病毒重组子的筛选方法，其特征在于：利用多角体蛋白筛选成功发生同源重组的病毒，通过有无多角体可救活及是否显示颜色作为筛选标记，获得线性化重组的带有多角体基因功能并实现融合蛋白的高效表达的成功发生同源重组的病毒。

6.权利要求3所述保藏号为CGMCC No. 2768的线性化病毒重组子表达与纯化蛋白质的方法，其特征在于：

（1）利用权利要求3所述的保藏号为CGMCC No. 2768的线性化病毒重组子感染宿主体，表达多角体蛋白与目的蛋白的融合蛋白；

（2）分离步骤（1）表达的融合蛋白，纯化、蛋白酶酶切得到目的蛋白。

7.根据权利要求6所述的保藏号为CGMCC No. 2768的线性化病毒重组子表达与纯化蛋白质的方法，其特征在于：所述融合蛋白的分离是利用多角体蛋白易于形成蛋白结晶而实现的。

8.根据权利要求6所述的保藏号为CGMCC No. 2768的线性化病毒重组子表达与纯化蛋白质的方法，其特征在于：目的蛋白的纯化是利用多角体蛋白抗体亲和层析和对纯化后的融合蛋白进行蛋白酶酶切而实现的。