[发明专利]一种新疆雪莲组织培养丛生苗及其大规模继代培养的方法

权利要求书

1、权利要求1所述的一种新疆雪莲组织培养丛生苗及其大规模 继代培养的方法，其特征在于，采用野生新疆雪莲的种胚或由种子 萌发的无菌苗为外植体，在含激素的MS(配方见附表1)改良培养 基①(MS基本培养基+6-BA 0.1-0.5mg/L+NAA1-3mg/L+蔗糖3％+ 琼脂0.6％)上诱导愈伤组织；在含激素的MS(配方见附表1)改 良培养基②(MS基本培养基+6-BA 2.0-4.0mg/L+NAA 0.1-1.0mg/L+ 蔗糖3％+琼脂0.6％)上通过愈伤组织筛选和继代诱导出一种可稳定 继代、芽点突出的愈伤组织XCSY-1；将愈伤组织XCSY-1转接至壮 苗培养基上壮苗，形成新疆雪莲丛生苗。具体操作按下列步骤进行：

a、植株诱导

选取成熟的雪莲种子，用75％的酒精溶液浸泡30秒，用0.1％ 升汞溶液浸泡振荡灭菌10分钟，用无菌水清洗4-5次；用含有赤霉 素2.0-1.0mg/L的水溶液中浸泡24小时；浸泡24小时后，将种子再 次使用0.1％升汞溶液浸泡振荡灭菌10分钟，用无菌水清洗4-5次； 在无菌条件下剥去种子外壳，撕去种子内膜，将去皮种子接种在配 好的植株诱导MS培养基(MS基本培养基+赤霉素2.0-1.0mg/L+蔗 糖3％+琼脂0.6％)上，每40毫升培养基播种10粒种子；在25℃下， 避光培养5天，待种子发芽后，将培养物转移至光照条件下培养4 天，培养成雪莲植株；

b、诱导愈伤组织

取无菌苗根、茎、叶及子叶、胚芽做外植体，在无菌条件下，用 无菌手术剪刀和无菌镊子将无菌苗根、茎、叶及子叶、胚芽切成 2-5mm长的小段，接种在MS改良培养基①(MS基本培养基+6-BA 0.1-0.5mg/L+NAA1-3mg/L+蔗糖3％+琼脂0.6％)上，22-27℃暗培 养，7-10天诱导出愈伤组织。

c、诱导愈伤组织XCSY-1

将诱导形成的愈伤组织转至MS改良培养基②(MS基本培养基 +6-BA2.0-4.0mg/L+NAA 0.1-1.0mg/L+蔗糖3％+琼脂0.6％)上，诱 导愈伤组织XCSY-1，继代时间15-20天，培养温度为22℃-28℃， 光照强度为2200-2700lux，光照时间为8-12小时/天。

d、愈伤组织XCSY-1继代培养

选取生长旺盛、颜色为嫩绿色或黄绿色、结构紧凑、带有明显 尖状突起组织特征的愈伤组织进行周期性的继代培养。培养条件， 每100ml MS改良培养基②中转接愈伤组织XCSY-12g，培养周期 15-20天，培养温度为22℃-28℃，光照强度为2200-2700lux，光照 时间为8-12小时/天；至培养期，选取生长旺盛、颜色为嫩绿色或黄 绿色、芽点突出特征的愈伤组织作为种子，种子量为生产量的30％， 其他转入壮苗培养基中培养丛生苗。

e、丛生苗的培养

将筛选出愈伤组织XCSY-1的转至壮苗培养基(MS基本培养基 +6-BA1.0-3.0mg/L+NAA 0.1-0.5mg/L+蔗糖3％+琼脂0.6％)中，愈 伤组织分化，组织上生长出从生苗。培养期结束，丛生苗的叶片数 为6-10片、净高5-7cm。培养时间为15-20天，培养温度为22℃-28 ℃，光照强度为2200-2700lux，光照时间为8-12小时/天。培养结 束后，直接收集丛生苗并低温真空干燥，成为新疆雪莲丛生苗组织 培养产品。