[发明专利]铁皮石斛原球茎培养物及其大规模继代培养的方法

说明书

技术领域

本发明涉及药用植物的组织培养物及其培养方法，特别是涉及一种铁皮 石斛原球茎培养物及其培养的方法，属植物生物技术工程领域。

背景技术

铁皮石斛Herba Dendrodii Officinalis别名铁皮兰、黑节草。来源为 兰科植物铁皮石斛Dendrobium officinale Kimura et Migo的茎。植物形 态茎圆柱形，高15～50cm，粗4～8mm。叶鞘带肉质，矩圆状披针形，长3～ 6.5cm，宽0.8～2cm，顶端略钩。总状花序生于具叶或无叶茎的中部，有花 2～4朵；花淡黄绿色，稍有香气；萼片长1.2～2cm；花瓣短于萼片，唇瓣 卵状披针形，长1.3～1.6cm宽7～9mm，先端渐尖或短渐尖，近上部中间有 圆形紫色斑块，近下部中间有黄色胼胝体。花期4～6月。生于树上和岩石 上。多加工成枫斗。

道教医学经典《道藏》中，铁皮石斛名列中华“九大仙草”之首。明代 李时珍的《本草纲目》中记载：石斛除痹下气、补内脏虚劳赢瘦，强阴益精。 久服，厚肠胃，补内绝不足。来胃气，长肌肉，益智除惊，轻身延年。1987 年国务院将铁皮石斛列为重点保护的中药材之一。

目前石斛生产主要采用，试管苗繁殖到温室种植，生产周期较长达3-4 年。

发明内容

本发明目的是提供一种铁皮石斛原球茎培养物大规模继代培养的方法， 代替人工种植，有生产周期短，可控环境等特征。

本发明目的是通过如下技术方案实现的。

本发明铁皮石斛原球茎大规模继代培养的方法包括以下步骤：

I、植株诱导：

A、选取健壮铁皮石斛野生苗，选取其茎段为外植体，先用流水冲洗干 净，放入灭菌的广口瓶内再用75％酒精消毒20-30秒，用无菌水冲洗2次， 将冲洗后的茎尖用0.1％的升汞浸泡8-11分钟，然后用无菌水冲洗4-5次， 接种于下列无菌培养及内，诱导无菌侧芽，在温度25±2度，光照强度 1600-2000LUX、光照时间10小时培养30天；

B、选择生长良好，色泽深绿、大小适中的的侧芽茎段为种源，在超净 工作台上接种于原球茎诱导培养基内，在温度25±2度，光照强度 1600-2000LUX、光照时间10小时培养60天，即可得原球茎。

C、原球茎增殖筛选驯化：将诱导的原球茎，在25±2度，光照强度 1600-2000LUX、光照时间10小时，继代培养，45天/代，经过20代继代筛 选，获得可用于无激素培养的铁皮石斛原球茎；

D、原球茎继代

将筛选的原球茎在间歇式液态培养基上，接种浓度10％，25±2度，光 照强度1600-2000LUX、光照时间10小时间歇式培养18-22天，转移到固态 培养基1g/瓶，25±2度，光照强度1600-2000LUX、光照时间10小时培养 45天；

2、根据权利要求所述的铁皮石斛无激素培养方法，所述培养基：

分别称取硝酸钾190重量份、硝酸铵165重量份、硫酸镁37重量份、 磷酸二氢钾17重量份、氯化钙44重量份，分别加水1000体积份，并加热 至完全溶解；将5种溶液混合，加水至5000体积份，混合均匀，得MS培养 基母液A，4℃保存备用；

分别称取硫酸锰6.76重量份、硫酸锌3.44重量份、硼酸2.48重量份、 碘化钾0.332重量份、钼酸钠0.1重量份、硫酸铜0.00005重量份、氯化钴 0.00005重量份，分别加水200体积份，并加热到完全溶解；将7种溶液混 合，加水至2000体积份，混合均匀，得MS培养基母液B，4℃保存备用；

分别称取EDTA-2Na7.45重量份、硫酸亚铁5.57重量份，分别加水1000 体积份，并加热至完全溶解；将2种溶液混匀，加热，加水至2000体积份， 得MS培养基母液C，4℃保存备用；

称取甘氨酸0.4重量份、盐酸硫胺素0.08重量份、盐酸吡哆素0.1重 量份、烟酸0.1重量份、肌醇20重量份，加水1000体积份，并加热至完全 溶解，加水至1000体积份，混合均匀，得MS培养基母液D，4℃保存备用；