[发明专利]LTB-羧甲基壳聚糖流感疫苗鼻腔免疫微球的制备方法

权利要求书

1、一种LTB-羧甲基壳聚糖流感疫苗鼻腔免疫微球的制备方法，其特征是：

1.1、取羧甲基壳聚糖溶液和氯化钠溶液混合得混合水溶液，碳化二亚胺类化合物溶解于二甲基亚砜溶剂中，向混合水溶液中加入含有碳化二亚胺类化合物的二甲基亚砜溶液，搅拌30～60分钟，4～8℃反应1～8小时，最终得混悬液，向混悬液中加入LTB的PBS缓冲液，pH6.5～.0，4～8℃反应1～8小时，加入甘氨酸反应1～4小时，反应液过硅胶柱，洗脱液：乙酸-水-丁醇，摩尔比为1：1～3：4～8，收集产物；用流动去离子水透析24～48小时，收集透析液的LTB-羧甲基壳聚糖交联物，LTB、甘氨酸、碳化二亚胺类化合物、氯化钠、羧甲基壳聚糖质量比为1：1～10：1～10：1～10：50～100；

1.2、取LTB-羧甲基壳聚糖交联物溶解于PBS缓冲液中，pH6.5～8.0，将流感裂解疫苗和表面活性剂溶解在LTB-羧甲基壳聚糖交联物PBS缓冲液中作为水相，流感裂解疫苗、表面活性剂与交联物的质量比为1：10～50：100～500；

1.3、将第二步的水相加入到油相中，搅拌形成稳定的乳液；其中水相与油相的体积比为1：5～20，搅拌45～90分钟，转速为500～4000转/分钟；

1.4、向第三步制得的乳液中加入浓度为1～30％(w/v)的固化剂，乳液与固化剂溶液的体积比1：1～2，继续搅拌1～3小时后停止；

1.5、离心分离第四步制得的分散体系，分出下层的微球，洗涤，真空干燥得到LTB-羧甲基壳聚糖流感疫苗微球。

2、根据权利要求1所述的LTB-羧甲基壳聚糖流感疫苗鼻腔免疫微球的制备方法，其特征是：所述的碳化二亚胺类化合物是二乙基碳化二亚胺、二苯基碳化二亚胺、乙丙基碳化二亚胺或1-乙基-3(3，-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺。

3、根据权利要求1所述的LTB-羧甲基壳聚糖流感疫苗鼻腔免疫微球的制备方法，其特征是：所述的表面活性剂是Span20、Span40、Span60、Span80、吐温20、吐温40、吐温60或吐温80。

4、根据权利要求1所述的LTB-羧甲基壳聚糖流感疫苗鼻腔免疫微球的制备方法，其特征是：所述的油相是液体石蜡、花生油、玉米油、大豆油或橄榄油。

5、根据权利要求1所述的LTB-羧甲基壳聚糖流感疫苗鼻腔免疫微球的制备方法，其特征是：所述的固化剂是甲醛、戊二醛、香草醛、三聚磷酸钠、硫酸钠或柠檬酸钠。

6、根据权利要求1所述的LTB-羧甲基壳聚糖流感疫苗鼻腔免疫微球的制备方法，其特征是：离心分离时分别用石油醚和蒸馏水依次充分洗涤，并在室温下真空干燥。