[发明专利]固定scFv文库的蛋白质均衡器及制备和应用

权利要求书

1.一种固定scFv文库的蛋白质均衡器，其特征在于：于聚丙烯酰胺冷凝胶整体材料表面化学键合有M13噬菌体展示scFv文库。

2.按照权利要求1所述的蛋白质均衡器，其特征在于：所述聚丙烯酰胺冷凝胶整体材料为30-100μm的大孔径聚丙烯酰胺冷凝胶整体材料；每mL冷凝胶整体材料表面键合1×10¹⁰-1×10¹³个M13噬菌体。

3.一种权利要求1所述蛋白质均衡器的制备方法，其特征在于：30-100μm的大孔径聚丙烯酰胺冷凝胶整体材料载体经活化后，将M13噬菌体展示scFv文库键合于其表面，每mL冷凝胶整体材料表面键合1×10¹⁰-1×10¹³个M13噬菌体，制备成固定M13噬菌体展示scFv文库的蛋白质均衡器。

4.按照权利要求3所述蛋白质均衡器的制备方法，其特征在于：所述载体表面活化的过程为，先以过量的0.5M己二胺通入聚丙烯酰胺冷凝胶整体材料、活化聚丙烯酰胺基质；再通入过量的质量分数5％的戊二醛反应，反应时间3-20小时。

5.按照权利要求3所述蛋白质均衡器的制备方法，其特征在于：所述将M13噬菌体展示scFv文库键合于载体表面的过程为，于聚丙烯酰胺冷凝胶整体材料中通入含有M13噬菌体展示scFv文库的磷酸盐缓冲液，PH范围7.4～7.6，磷酸盐的盐浓度为25～30mM，键合反应温度为20-30℃，反应时间12-24小时，每mL磷酸盐缓冲液中含有1×10¹⁰-1×10¹³个M13噬菌体。

6.一种权利要求1所述蛋白质均衡器的应用，其特征在于：所述均衡器可用于蛋白质样品预处理，降低高丰度蛋白质的浓度并对低丰度蛋白质进行富集，降低样品复杂程度，提高蛋白质检测数目。

7.按照权利要求6所述蛋白质均衡器的应用，其特征在于：可将蛋白质均衡器装入5mL体积的层析柱中或涂覆在玻璃板上进行应用。

8.按照权利要求6所述蛋白质均衡器的应用，其特征在于：利用固定M13噬菌体展示scFv文库的蛋白质均衡器处理蛋白质样品时，所采用的洗脱过程为，以1-2M NaCL、25-100mM pH2-3的Gly-HCL缓冲液和0.01-0.05unit/μL的凝血酶溶液进行三步洗脱，即利用高盐、低pH和生物活性酶三种不同类型洗脱试剂的结合，实现柱上结合蛋白质的完全洗脱。