[发明专利]一种以氯嘧磺隆为底物的混菌降解菌剂的筛选方法无效
| 申请号： | 200910010877.8 | 申请日： | 2009-03-25 |
| 公开（公告）号： | CN101845393A | 公开（公告）日： | 2010-09-29 |
| 发明（设计）人： | 张惠文;张晓黎;蔡颖慧;李旭;李新宇;苏振成 | 申请（专利权）人： | 中国科学院沈阳应用生态研究所 |
| 主分类号： | C12N1/00 | 分类号： | C12N1/00;C12Q1/04;A62D3/02;A62D101/28;A62D101/04;C12R1/00 |
| 代理公司： | 沈阳科苑专利商标代理有限公司 21002 | 代理人： | 许宗富;周秀梅 |
| 地址： | 110016 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 氯嘧磺隆 降解 筛选 方法 | ||
1.一种以氯嘧磺隆为底物的混菌降解菌剂的筛选方法，其特征在于：取土壤菌悬液，在1/5LB培养基中添加氯嘧磺隆浓度为100mg/L，按照体积百分比5-10％的接种量接种菌悬液，28-30℃，150-180r/min摇床培养5-7天，按体积百分比5-10％的接种量将培养液接种于新的1/5LB培养基，氯嘧磺隆的浓度按100mg/L递增，依次类推，5次转接后，培养基中氯嘧磺隆浓度为500mg/L，再按体积比5-10％的接种量转接5次，氯嘧磺隆的添加浓度始终为500mg/L，得到富集的混菌菌种，液相色谱法测得该混菌菌种对培养基中氯嘧磺隆的降解率达到70％以上，将上述菌种发酵扩大培养经处理后，即得到以氯嘧磺隆为底物的混菌降解菌剂。
2.根据权利要求1所述的以氯嘧磺隆为底物的混菌降解菌剂的筛选方法，其特征在于：所述的1/5LB培养基的配方为：胰蛋白胨2g，酵母粉1g，氯化钠2g，蒸馏水1000ml pH＝7.0。
3.根据权利要求1所述的以氯嘧磺隆为底物的混菌降解菌剂的筛选方法，其特征在于：液相色谱法测降解率的条件为，C18反相柱(4.6um×250mm)，DAD二级管阵列检测器，流动相为甲醇、水和冰醋酸，其体积比为：70∶30∶0.1；流速为1ml/min；检测波长为254nm；柱温为28-30℃；进样量为5-10μl。
4.根据权利要求1所述的以氯嘧磺隆为底物的混菌降解菌剂的筛选方法，其特征在于：所述发酵培养为，富集得到的混菌菌种，在1/5LB培养基中，进行发酵扩大培养，发酵结束后菌体数量达到10亿个/mL以上，用麦麸和泥炭在40-50℃下吸附风干粉碎，即得到以氯嘧磺隆为底物的混菌降解菌剂。
5.根据权利要求4所述的以氯嘧磺隆为底物的混菌降解菌剂的筛选方法，其特征在于：扩大培养，发酵罐的条件为；无菌空气的通气量为1∶0.8-1，搅拌速度为180-200r/min，培养温度为28-30℃，培养时间为48-60h。
6.根据权利要求4所述的以氯嘧磺隆为底物的混菌降解菌剂的筛选方法，其特征在于：二级发酵结束后菌体数量达到10亿个/ml以上，用质量比2∶8-1∶9的麦麸和泥炭吸附，在40-50℃下吸附风干粉碎。
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