[发明专利]一种迟缓爱德华氏菌DNA疫苗及其构建和应用

权利要求书

1.一种迟缓爱德华氏菌DNA疫苗的构建方法，其特征在于：

1)质粒pPC2的构建：将质粒pCI-neo用XhoI/SmaI酶切，回收5.4kb片段，与寡聚核苷酸片段L86连接，将连接产物转化到大肠杆菌DH5，而后在含安卡青霉素(Ap)的LB固体培养基上培养，筛选转化子提取质粒，即为质粒pPC2；所述寡聚核苷酸片段L86为5’-TCGAGATATCGGAGGAGGAGGAGGAGGAGGAGGAGGAGGAGGAGGAGGAGGACCC-3’；

2)质粒pCFC的构建：以迟缓爱德华氏菌TX1为模板，用引物F8，F8为5’-AGTACTGCCACCATGGCACAAGTAATCAACACCA-3’和R6，R6为5’-CCCGGGACGCAGCAGAGACAGGA-3’，PCR扩增，PCR产物与PCR克隆载体pBS-T连接，将连接产物转化到大肠杆菌DH5α而后在含有100ug/ml Ap、40ug/mlXga1(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-乳糖苷)和24ug/ml异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)的LB固体培养基上培养，筛选出白色转化子，得质粒pBSFC；所得质粒pBSFC用ScaI/SmaI酶切，回收1.2kb片段；将步骤1)的质粒pPC2用EcoRV酶切后回收5.4kb片段；将步骤1)的质粒pPC2酶切回收片段与质粒pBSFC酶切回收片段用T4DNA连接酶连接，连接液转化入大肠杆菌DH5α后在含安卡青霉素的LB固体培养基上培养，筛选转化子提取质粒，即为pCFC；

3)质粒pFXV6的构建：以迟缓爱德华氏菌TX1为模板，用引物F5，F5为5’-GGCTCGGCGGATCT-3’和R8，R8为5’-ATGGACGCGCAGATCAAA-3’，PCR扩增，将PCR产物纯化；将步骤2)质粒pCFC用SmaI 酶切，回收6.6kb片段，将回收片段与纯化的PCR产物用T4DNA连接酶连接，连接混合液转化大肠杆菌DH5α后在含有100ug/ml Ap的LB固体培养基上培养，筛选转化子提取质粒，即为迟缓爱德华氏菌DNA疫苗。

2.一种迟缓爱德华氏菌DNA疫苗，其特征在于：所述疫苗为采用权利要求1所述的构建方法构建的迟缓爱德华氏菌DNA疫苗。