[发明专利]β-葡聚糖酶活力的测定方法

权利要求书

1.一种β-葡聚糖酶活力的测定方法，其特征是；

A，制作用MBTH法测得的葡萄糖的吸光度值与其相应浓度的标准对应关系曲线；

B，用MBTH法检测待测β-葡聚糖酶水解β-葡聚糖后产生的相当于葡萄糖的吸光度值；根据上一步骤制作的葡萄糖浓度与测得的相应的吸光度值之间的标准对应关系曲线确定待测β-葡聚糖酶的酶解产物中在单位时间内所产生的相当于葡萄糖的还原糖的含量，以此来推算β-葡聚糖酶的活力。

2.根据权利要求1所述的β-葡聚糖酶活力的测定方法，其特征是；上述步骤A的具体步骤是；分别取6-15组具有不同浓度的葡萄糖标准溶液0.6mL，浓度范围在0-30微克/毫升之间，加入0.6mL 0.5当量的NaOH溶液，混匀，再加入MBTH试剂0.6mL于75-85℃水浴加热8-20min后趁热加入硫酸铁铵试剂1.2mL，室温冷却后于波长620-680nm处测定吸光度值；每个浓度做三个平行样；以上加量可按比例增减；根据每组葡萄糖浓度与测得的吸光度值之间的关系绘制标准对应关系曲线；

3.根据权利要求1或2所述的β-葡聚糖酶活力的测定方法，其特征是；上述步骤B的具体步骤是；将终浓度为1-5mg/mL的预热至测定温度的β-葡聚糖溶液，加入到预热至相应温度的β-葡聚糖酶溶液中开始水解反应，酶解温度为25-40℃，水解时间为60min以内，将该酶解液与等体积的0.5当量的NaOH溶液迅速混合以终止反应，可在反应过程中分阶段取样，从中取1.2mL加入到试管中做三个平行样，再加入MBTH试剂0.6mL于75-85℃水浴加热5-20min后趁热加入硫酸铁铵试剂1.2mL，室温冷却后于波长620-680nm处测定吸光度值，根据步骤A制作的葡萄糖浓度与测得的相应吸光度值之间的标准对应关系曲线确定酶解产物中所含有的相当于葡萄糖的还原糖浓度，以此来推算β-葡聚糖酶的活力；β-葡聚糖酶的活力单位可被定义为在上述条件下，每毫升反应体系每分钟产生1nmol相当于葡萄糖的量所需的酶量为一个酶活力单位；其中MBTH试剂的制法是3mg/mL的3-甲基-2-苯并噻唑酮腙溶液和1mg/mL的二硫苏糖醇溶液等体积混合即得，现用现配，一天内有效。

4.根据权利要求3所述的β-葡聚糖酶活力的测定方法，其特征是；上述硫酸铁铵试剂的制法是0.5％FeNH₄(SO₄)₂·12H₂O，0.5％氨基磺酸，0.5当量盐酸。

5.根据权利要求3所述的β-葡聚糖酶活力的测定方法，其特征是；上述β-葡聚糖酶溶液以50mM的丁二酸或醋酸溶液为溶剂。

6.根据权利要求3所述的β-葡聚糖酶活力的测定方法，其特征是；上述测定吸光度值的最佳波长为650nm。