[发明专利]细胞松弛素类化合物及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及细胞增殖抑制剂或抗肿瘤剂，具体的说是一种细胞松弛素 类化合物及其制备方法和用途。

背景技术

海洋生物因其所处的高盐、高压、低温、低营养等特殊的生活环境而 产生和积累了许多结构新颖、生物活性显著的次级代谢产物，成为研究发 现新型海洋药物的重要资源。而海洋微生物因其可常年人工大规模培养并 且代谢过程可被人工调节的特点，相对于其他海洋生物资源而言，又避免 了生长季节及自然生物量的限制，不致引起生态破坏，相对易于解决药源 问题，因此在生物活性物质研究及后续开发方面具有独特的优势。

内生真菌(Endophytic fungus)是指内共生在宿主体内、但不引起宿主 明显致病症状的一类真菌。内生真菌与宿主之间存在着相互依赖的互惠共 生关系，在与宿主协同进化的过程中可产生结构新颖、生物活性显著的次 生代谢产物，已成为天然活性物质的重要来源。最近几年，随着全世界对 海洋生物资源研究的不断深入，海洋真菌由于其资源优势和新颖的次生代 谢产物，成为海洋天然产物的研究热点。

发明内容

本发明旨在提供一种细胞松弛素类化合物及其制备方法和用途。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

细胞松弛素类化合物，如图(I)中化合物1或2所示：

制备方法：

1)将球毛壳菌(Chaetomium globosum)经发酵培养，而后将发酵液经用 有机溶液提取2-5次，合并提取液进行浓缩，获得发酵物；

2)将步骤1)中的发酵物经硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯和氯仿- 甲醇分别进行梯度洗脱，洗脱下的每个组分经薄层层析检测；

所述石油醚-乙酸乙酯梯度范围为100∶0-0∶100、；氯仿-甲醇梯度范 围为100∶10-0∶100；

3)将步骤2)中经经薄层层析检测Rf 0.3-0.5的洗脱组分进行硅胶柱 层析、凝胶柱层析，再经反相柱层析分离纯化，而后以甲醇-水80∶20洗 脱，洗脱液经薄层层析检测，展开剂为氯仿∶甲醇＝10∶1，Rf为0.38并经 HPLC分析(甲醇∶水＝55∶45)保留时间为24.86分钟即图(I)中化合物 1；薄层层析检测展开剂为氯仿∶甲醇＝10∶1，Rf为0.42并经HPLC分析(甲 醇∶水＝55∶45)保留时间为29.61分钟为图(I)中化合物2。

步骤1)中所得的发酵培养物为菌丝体和发酵液，发酵液用有机溶剂乙 酸乙酯萃取，菌丝体用可用甲醇、丙酮-水(80-20)、乙醇或氯仿-甲醇1∶ 1中一种或几种萃取，萃取后得到的菌丝体和发酵液合并得发酵物。

所述球毛壳菌(Chaetomium globosum)酵培养，首先将在琼脂-麦芽膏 培养基中保存的球毛壳菌接种到PDA平板上，在28℃培养箱中培养4天， 其次在平板上取大小为4cm²的菌丝体放入已灭菌盛有300ml液体培养基上 静置室温培养30天。所述液体培养基为土豆200g/L，葡萄糖20g/L，蛋 白胨5g/L，酵母膏3g/L，pH 6.5。

细胞松弛素类化合物的应用，可作为细胞增殖抑制剂或肿瘤细胞杀伤 剂中应用。同时可作为抑制肿瘤细胞增殖药物或抗肿瘤药物中应用。

本发明所具有的优点：

1.本发明所得的化合物采用MTT法测试对于A-549细胞株的抗肿瘤活 性，试验证明，本发明所得的化合物对肿瘤细胞有增殖抑制作用；其用作 细胞增殖抑制剂或肿瘤细胞杀伤剂。

2.本发明细胞松弛素类化合物从球毛壳菌(Chaetomium globosum)内生 真菌中通过人工发酵培养经分离纯化获得。经实验表明化合物对人肺癌细 胞株A-549的半数抑制浓度IC₅₀分别2.55，2.26μM，具有抗肿瘤活性，可 作为细胞增殖抑制剂或肿瘤细胞杀伤剂。

3.本发明细胞松弛素类化合物具有细胞增殖抑制以及直接杀伤癌细胞 等抗肿瘤活性可用在制备肿瘤细胞增殖抑制剂或抗肿瘤剂中。

具体实施方式

实施例1

细胞松弛素类化合物1或2的化学结构分别是(结构式中的阿拉伯数字 式化学结构中的碳原子的标位)：

细胞松弛素类化合物的制备方法：