[发明专利]一种莱克多巴胺人工抗原的合成方法

权利要求书

1.一种莱克多巴胺人工抗原的合成方法，其特征在于先将莱克多巴胺与活化对氨基苯甲酸相联，以制备莱克多巴胺活性中间体，再以乙基[3-(二甲胺基)丙基]碳二亚胺为交联剂，将该莱克多巴胺活性中间体与载体蛋白上的氨基相偶联，经冷冻透析和干燥后得莱克多巴胺人工抗原。

2.如权利要求1所述莱克多巴胺人工抗原的合成方法，其特征在于制备所述活化对氨基苯甲酸时，按摩尔比为1～2∶1的比例称取亚硝酸钠和对氨基苯甲酸，将亚硝酸钠和对氨基苯甲酸分别溶在蒸馏水和0.1～0.2mol/L的盐酸中，冰浴搅拌，将亚硝酸钠水溶液逐滴加入到对氨基苯甲酸的盐酸溶液中，避光反应0.5～1.5小时。

3.如权利要求1所述莱克多巴胺人工抗原的合成方法，其特征在于制备所述的莱克多巴胺活性中间体时，按照与对氨基苯甲酸的摩尔比为0.5～2∶1的比例称取莱克多巴胺，溶在冰冷的pH为8.5～9.5、含0.14～0.15mol/L氯化钠的硼砂缓冲溶液中，冰浴搅拌，将活化的对氨基苯甲酸溶液0.5～1.5ml逐滴加入到该缓冲溶液中，室温避光反应2～6小时。

4.如权利要求1所述莱克多巴胺人工抗原的合成方法，其特征在于所述的莱克多巴胺活性中间体与载体蛋白相偶联时，向莱克多巴胺活性中间体溶液中加入硼酸晶体调pH至7.0～8.0，然后按载体蛋白与莱克多巴胺的摩尔比为1∶20～40的比例称取载体蛋白加入莱克多巴胺活性中间体溶液中，使载体蛋白的终浓度为8-12mg/ml，然后再按莱克多巴胺与乙基[3-(二甲胺基)丙基]碳二亚胺、羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为1∶7～10∶3～7的比例，室温搅拌3～5小时。

5.如权利要求1所述莱克多巴胺人工抗原的合成方法，其特征在于所述的冷冻透析时，将莱克多巴胺与载体蛋白的偶联物溶液转移至透析袋中，以pH为7.30～7.50、浓度为0.01mol/L～0.02mol/L的磷酸缓冲液为透析外液，在0～4℃环境中搅拌透析70～80小时，然后改用蒸馏水为透析外液，在0～4℃环境中搅拌透析20～30小时，每5～7小时更换一次透析液。