[发明专利]一种莱克多巴胺人工抗原的合成方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种β-兴奋剂类药物，尤其涉及一种莱克多巴胺(Ractopamine)人工抗原的合成方法。

背景技术

莱克多巴胺是一种β-兴奋剂类药物，与其他β-兴奋剂类药物如克伦特罗(Clenbuterol)、卡布特罗(carbuterol)、沙丁胺醇(salbutamol)等具有类似结构。众所周知，β-兴奋剂能够影响营养物质在动物体内的流向和重新分配，能有效地促进肌肉组织生长，降低胴体脂肪含量，提高瘦肉率和增加瘦肉产量，因此在欧美地区曾被广泛使用。但是，由于β-兴奋剂具有类似肾上腺素的化学结构和作用机理，能与细胞表面的β-受体结合而引起诸如心悸、头疼、目眩、恶心、呕吐、战栗、神经过敏、血管扩张、心率加快等生理作用，而且这类化合物具有口服活性，如果超量使用会对机体的肝肾等内脏器官产生一定的毒副作用，目前欧美各国均禁止其在畜牧生产上的应用，美国规定只能用于科研，我国农业部也严禁该类药物作为添加剂使用。但是由于经济利益的驱使，在畜牧生产中仍然存在违规使用现象，致使该类药物在动物体内残留，畜禽产品出口屡遭绿色壁垒，损害了我国出口产品的国际声誉，影响了畜牧业的健康发展，给整个产业造成很大的经济损失。为了应对该类药物残留给整个产业发展和食品安全保障所带来的挑战，我国政府加大了对药物添加剂的检测力度，修订和颁布了更为严格的法律和规范。对畜产品生产过程进行监控和执法，一是制定最高残留限量的标准，二是改进残留分析方法和技术，发展快速、准确和高灵敏度的检测手段。随着对最常用的β-兴奋剂—盐酸克伦特罗检测力度的加大，非法使用者开始使用其它代替品，莱克多巴胺与盐酸克伦特罗的促生长作用相似，其在动物体内的消除时间比克伦特罗短，毒性较弱，因此，莱克多巴胺成为继盐酸克伦特罗之后的最主要的代替品之一。在当前的国际国内新形势下，研究开发具有自主知识产权的莱克多巴胺的残留检测方法具有积极的现实意义。

在β-兴奋剂药物的残留检测中，酶联免疫法(ELISA)基于抗原抗体反应和酶化学反应，具有灵敏、快速、特异性好、样品需求量少，对昂贵仪器以及专业操作人员的依赖程度较低等优点，非常适于现场监控和样品的批量检测，而且酶联免疫法的操作过程所需试剂大部分为无机化学试剂，且用量较少，因此该法属于环境友好型检测方法。但是莱克多巴胺属于小分子化合物，这类化合物分子属于半抗原，虽具有免疫反应性但是不具有免疫原性，欲对其进行免疫检测分析必须把这些化合物与大分子的载体偶联以形成既具有免疫原性又具有免疫反应性的全抗原，因此，合成β-兴奋剂类药物的全抗原就成为对其进行免疫检测的关键技术。

发明内容

本发明的目的是提供一种莱克多巴胺人工抗原的合成方法，它能满足现有技术的上述需求。

一种莱克多巴胺人工抗原的的制备方法，其特征在于先将莱克多巴胺与活化对氨基苯甲酸相联，制备带有羧基的莱克多巴胺活性中间体，再以乙基[3-(二甲胺基)丙基]碳二亚胺为交联剂，将该莱克多巴胺活性中间体与载体蛋白上的氨基相偶联，经透析及冷冻干燥，得莱克多巴胺人工抗原。

本发明的合成方法可以成功地把莱克多巴胺与载体蛋白偶联起来，从而制备了能够在动物体内引发免疫反应，产生抗体的完全免疫原—莱克多巴胺人工抗原。

附图说明

附图为莱克多巴胺人工抗原的紫外吸收光谱图。图中BSA为牛血清蛋白，RAC为莱克多巴胺，RAC-BSA为莱克多巴胺人工抗原。

具体实施方式

莱克多巴胺人工抗原的合成方法

(1)活化对氨基苯甲酸的制备：按摩尔比为1∶1的比例称取亚硝酸钠和对氨基苯甲酸，将亚硝酸钠和对氨基苯甲酸分别溶在蒸馏水和0.2mol/L的盐酸中，冰浴搅拌，将亚硝酸钠的水溶液逐滴加入到对氨基苯甲酸的盐酸溶液中，室温避光反应1小时，得到无色的活化对氨基苯甲酸溶液。

本发明中所述的亚硝酸钠和对氨基苯甲酸的摩尔比范围为1～2∶1；所述盐酸的浓度范围为0.1～0.2mol/L，室温避光反应时间范围为0.5～1.5小时。

(2)莱克多巴胺活性中间体的制备：与活化对氨基苯甲酸的摩尔比为0.5∶1的比例称取莱克多巴胺，溶在冰冷的硼砂缓冲溶液中(pH＝8.5～9.5，含0.15mol/L的氯化钠)，冰浴搅拌，将活化对氨基苯甲酸溶液0.5～1.5ml逐滴加入到上述溶液中，室温避光反应2～6小时，得到莱克多巴胺活性中间体溶液。

本发明中所述的莱克多巴胺与活化对氨基苯甲酸的摩尔比为0.5～2∶1；所述硼砂缓冲液中氯化钠的浓度为0.14～0.15mol/L。