[发明专利]一种沙丁胺醇人工抗原及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种β-兴奋剂的人工抗原及其制备方法，尤其涉及一种沙丁胺醇(salbutamo1)人工抗原及其制备方法和应用。

背景技术

沙丁胺醇是β-兴奋剂类药物中的一种，众所周知，β-兴奋剂影响营养物质在动物体内的流向和分配，具有促进肌肉组织生长，降低胴体脂肪含量，提高瘦肉率以及增加瘦肉产量的作用。但是，β-兴奋剂具有类似肾上腺素的化学结构及作用机理，能与细胞表面的β-受体结合而引起对人与动物的肝肾等内脏器官的毒副作用。19世纪90年代，世界各地曾发生多起由于食用含β-兴奋剂类药物而中毒的事件，引起人们对于β-兴奋剂类药物安全性的高度重视。现在欧美各国均禁止其在畜牧生产上的应用，美国规定只能把它用于科研，我国有关部门也规定严禁作为添加剂使用。但是受经济利益的驱动，在畜牧生产中违法使用现象仍然存在，导致部分动物产品的禁用药物残留量过高，难以达到发达国家的要求，也严重地影响了我国畜禽产品的国际声誉，使贸易受阻，给整个产业造成很大的经济损失。为了实现畜牧业的健康发展，维护人们的健康，我国正不断加大该类药物的检测力度，制定更为严格的法律和规范措施。随着对最常用的β-兴奋剂——盐酸克伦特罗检测力度的加大，由于沙丁胺醇与盐酸克伦特罗的促生长作用相似，其在动物体内的消除时间比克伦特罗短，毒性较弱，因此成为继盐酸克伦特罗之后的最主要的代替品之一。研究开发具有沙丁胺醇的残留检测方法具有积极的现实意义。酶联免疫法(ELISA)是一种基于抗原抗体反应和酶化学反应的生物方法，具有灵敏、快速、特异性好、样品量少，对昂贵仪器以及专业操作人员的依赖程度较低等优点，非常适合于现场监控和样品的批量检测，而且酶联免疫法的操作过程所需试剂大部分为无机化学试剂，且用量较少，因此该法属于环境友好型检测方法。沙丁胺醇属于小分子化合物，这类化学分子属于半抗原，虽具有免疫反应性，但是不具有免疫原性，欲对其进行免疫检测分析必须先把这些化合物与大分子的载体偶联，以形成不但具有免疫原性而且具有免疫反应性的全抗原，因此，合成类似物质的全抗原就成为对该类药物进行免疫检测的关键技术。

发明内容

本发明的目的是提供一种沙丁胺醇人工抗原及其制备方法和应用，它能满足现有技术的上述需求。

一种沙丁胺醇人工抗原，其特征在于它由沙丁胺醇与载体蛋白偶联构成，结构式为：

式中载体蛋白protein为牛血清蛋白或者卵清蛋白，n为整数1～15。

上述沙丁胺醇人工抗原的制备方法，其特征在于首先将沙丁胺醇与活化对氨基本甲酸相联，形成带有羧基的沙丁胺醇活性中间体，再以乙基[3-(二甲胺基)丙基]碳二亚胺为交联剂，将带有羧基的沙丁胺醇活性中间体与载体蛋白上的氨基偶联，透析及冷冻干燥。

上述的沙丁胺醇人工抗原在制备沙丁胺醇多克隆抗体中的应用。

利用本发明可以成功地把沙丁胺醇半抗原与载体蛋白牛血清蛋白偶联起来，从而合成了能够在动物体内引发免疫反应、产生特异性抗体的完全免疫原——沙丁胺醇的人工抗原。该偶联物作为免疫原对新西兰大白兔进行免疫，成功地获得了对沙丁胺醇有特异反应的多克隆抗体。本发明的制备方法成本低廉、操作简易、重复性好。

附图说明

附图为沙丁胺醇人工抗原、沙丁胺醇、活化牛血清蛋白及对氨基苯甲酸的紫外吸收光谱图，其中a为对氨基苯甲酸，b为沙丁胺醇紫，c为沙丁胺醇人工抗原，d为活化牛血清蛋白。

具体实施方式

本发明的沙丁胺醇人工抗原由沙丁胺醇与载体蛋白牛血清蛋白或卵清蛋白偶联构成，其结构式为

式中：n为与一个牛血清蛋白或卵清蛋白分子结合的沙丁胺醇的分子数1～15，优选为整数1～10；protein为牛血清蛋白或卵清蛋白。牛血清蛋白(Cationized Bovine SerumAlbumin)的分子量范围是6.6KDa～6.9Kda，优选分子量范围是6.7～6.8Kda。

上述人工抗原显示出如下特征：(1)外观：淡黄色固体粉末；(2)紫外吸收波长：278nm，336nm。

制备上述沙丁胺醇人工抗原时，首先将沙丁胺醇与活化对氨基本甲酸相联，形成带有羧基的沙丁胺醇活性中间体，再以乙基[3-(二甲胺基)丙基]碳二亚胺为交联剂，将带有羧基的沙丁胺醇活性中间体与载体蛋白上的氨基偶联，透析及冷冻干燥，得到淡黄色固体粉末，即为沙丁胺醇的人工抗原。由于一个沙丁胺醇活性中间体只带有一个羧基，一载体蛋白分子上带有多个氨基，而沙丁胺醇活性中间体的量远大于载体蛋白的量，因此，二者反应即可形成如上述结构式所示结构。