[发明专利]苏木素在检测免疫效应细胞介导的细胞毒效应中的应用无效
| 申请号： | 200910017282.5 | 申请日： | 2009-07-31 |
| 公开（公告）号： | CN101650364A | 公开（公告）日： | 2010-02-17 |
| 发明（设计）人： | 王郡甫;张建华;陈红 | 申请（专利权）人： | 山东省医学科学院基础医学研究所 |
| 主分类号： | G01N33/53 | 分类号： | G01N33/53;G01N33/52;G01N21/31;C12Q1/00 |
| 代理公司： | 济南圣达专利商标事务所有限公司 | 代理人： | 杨 琪 |
| 地址： | 250061山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 苏木 检测 免疫 效应 细胞 中的 应用 | ||
1.苏木素在检测免疫效应细胞介导的细胞毒效应中的应用，其特征在于：适用于检测人NK 细胞系NK92、NKL和YT细胞对人贴壁细胞系SGC7901和Hep2细胞的细胞毒效应，以及检 测新西兰白兔CTL细胞对兔鳞癌细胞系VX2细胞的细胞毒效应；
应用方法如下：将贴壁肿瘤细胞悬液置于细胞培养板中，贴壁后，加入待测免疫效应细胞， 构成一定的效靶比，于培养箱中共孵育适当时间后，取出，弃上清，用PBS洗板3次后， 立即加入4%多聚甲醛固定30分钟，然后加入苏木素染色液，100μl/孔，染色20分钟后， 蒸馏水洗3～5次，室温晾干；加入1%的盐酸酒精脱色，100μl/孔，脱色后立即用酶标 仪测定540nm处的吸光度值并记录，计算各效靶比的杀伤率，公式如下：
其中，OD(E)表示效应细胞(E)孔OD值，OD(T)表示靶细胞(T)孔OD值，OD(E+T)表示效应 细胞(E)+靶细胞(T)孔OD值；
所述苏木素染色液配制方法如下：1.5g苏木素用5ml无水乙醇溶解,蒸馏水溶解钾明矾， 加温至90℃,勿煮沸,将溶解的苏木素和碘酸钠同时加入钾明矾水溶液内,流水冷却至室 温,再加甘油，震荡1小时后即可使用；
所述PBS是指0.01mol/L的磷酸盐缓冲液，PH=7.2。
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