[发明专利]一种难溶水产胶原蛋白源ACE抑制肽的制备方法

权利要求书

1.一种难溶水产胶原蛋白源ACE抑制肽的制备方法，采用高压高温使难溶性胶原蛋白变性，获得可溶性胶原蛋白，并使用金属酶或碱性酶对该可溶性胶原蛋白进行水解，进而提取具有胶原蛋白功效的ACE抑制肽，该方法按以下步骤进行：

步骤1：制备沉淀物

选取新鲜海洋生物扇贝外套膜，清洗，在2℃～4℃的温度条件下切块，然后，在2℃～4℃条件下粉碎成浆，经高速离心分离，得到沉淀物；

步骤2：除去胶原蛋白以外的蛋白质

取当量浓度为0.1N的苛性钠溶液，加入步骤1得到的沉淀物中，控制苛性钠溶液与该沉淀物的质量比为15～20∶1，在温度为2℃～4℃的环境中，搅拌12小时～48小时，然后，高速离心除去上清液，用蒸馏水清洗沉淀，高速离心除去上清液，得到沉淀物原料；

步骤3：分离高分子胶原蛋白和难溶胶原蛋白

分别取摩尔浓度为0.2M～0.5M的有机酸溶液和酸性蛋白酶，混合后，加入步骤2得到的沉淀物原料中，形成混合溶液，该混合溶液中，有机酸溶液与沉淀物原料的质量比为10～15∶1，酸性蛋白酶的基质比为0.2％～2％的，在温度为2℃～4℃的环境中，以20转/分～50转/分的速度搅拌12小时～24小时，然后，以30000rpm～100000rpm的转速离心分离，分别得到上清液和剩余物质，该上清液为高分子胶原蛋白，剩余物质为难溶胶原蛋白，

所述的有机酸溶液选用醋酸、柠檬酸、苹果酸、酒石酸或草酸中的一种或几种的组合，

所述的酸性蛋白酶选用胃蛋白酶或Aspergillus niger源酸性蛋白酶； 

步骤4：分解难溶胶原蛋白质

将步骤3得到的难溶胶原蛋白，用蒸馏水清洗后，再加入蒸馏水稀释，形成悬浮溶液，取当量浓度为2N的氢氧化钠溶液，加入该悬浮溶液中，调节悬浮溶液的pH值为7.0，然后，在压力为1.0～2.1kg/cm²、温度为120～132℃的条件下，煮沸1小时～2小时，冷却至室温，过滤，将得到的滤液冻结干燥，制得可溶性胶原蛋白粉末；

步骤5：取蒸馏水，将步骤4制得的可溶性胶原蛋白粉末加入该蒸馏水中，控制每毫升蒸馏水中加入10毫克～30毫克的可溶性胶原蛋白粉末，得到可溶性胶原蛋白溶液；

步骤6：制备酶解蛋白肽溶液

分别取氢氧化钠溶液和蛋白酶，将氢氧化钠溶液加入步骤5得到的可溶性胶原蛋白溶液中，根据所用蛋白酶的活性作用条件，调节该可溶性胶原蛋白溶液的pH值，然后，加入蛋白酶，控制溶液中蛋白酶的基质比为0.2％～2％，并在温度为30℃～60℃的条件下，搅拌酶解8小时～48小时，之后，在温度为98℃～115℃条件下，加热10分钟～15分钟，使蛋白酶失去活性，制得酶解蛋白肽溶液，

所述的蛋白酶选用Bacillus thermoproteolyticus源嗜热菌蛋白酶或Bacillus subtirus源碱性蛋白酶；

步骤7：将步骤6制得的酶解蛋白肽溶液高速离心分离，并收集上清液，将该上清液冻结干燥，即制得难溶水产胶原蛋白源ACE抑制肽。