[发明专利]一种难溶水产胶原蛋白源ACE抑制肽的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种ACE抑制肽的制备方法，特别涉及一种难溶水产胶原蛋白源ACE抑制肽的制备方法。

背景技术

高血压作为生活习惯病的一种，是现代社会的常见疾病，并引发多种疾病。现有治疗高血压的常用药物是化学合成的具有抑制血管紧张素转化酶功效的卡托普利，依拉普利等。这些药品具有不同程度的副作用，长期服用不利于患者的身体健康。因此，从安全性的角度出发，开发以天然食品资源为原料的高血压抑制蛋白肽，成为颇多学者的研究焦点。近几年从大豆蛋白、蒜，燕麦麸等植物蛋白和牛奶蛋白、鱼类蛋白等物质中提取用于治疗高血压的有效成分，取得了一定的成果，但所用原材料的成本高、功效单一，容易引发消费者对原材料的安全性产生疑虑。

以海洋生物体中提取的胶原蛋白肽，作为制造治疗高血压药物的原料，可消除人们对陆上动物胶原蛋白肽的安全疑虑，避免人畜共通感染症的发生。海洋性胶原蛋白普遍存在纤维结构纤细的特点，在提取过程中纤维结构容易被破坏，影响高分子胶原蛋白的品质和提取率，造成产品低效。而采用升高提取温度或延长酶解时间的方法，虽然可提高高分子胶原蛋白的提取率，但极易引起高分子胶原蛋白的分解，难以得到理想的高分子胶原蛋白。

目前，通常是在低温条件下，采用含有胃蛋白酶的醋酸、柠檬酸等酸性 溶液，对海洋生物体进行缓慢分解的方法，提取高分子胶原蛋白，但该方法最终将大量的高价值胶原蛋白残留在生产残渣中，造成高分子胶原蛋白生产率的极端低下，且工艺复杂、生产成本高。

发明内容

本发明的目的是提供一种难溶水产胶原蛋白源ACE抑制肽的制备方法，不仅可从海洋生物体中提取高分子胶原蛋白，而且以提取该高分子胶原蛋白的生产残渣为原料，利用该生产残渣中存留的难溶胶原蛋白制得ACE抑制肽，提高自海洋生物体中提取高分子胶原蛋白的生产率，且工艺简单，成本低。

本发明所采用的技术方案是，一种难溶水产胶原蛋白源ACE抑制肽的制备方法，采用高压高温使难溶性胶原蛋白变性，获得可溶性胶原蛋白，并使用金属酶或碱性酶对该可溶性胶原蛋白进行水解，进而提取具有胶原蛋白功效的ACE抑制肽，该方法按以下步骤进行：

步骤1：制备沉淀物

选取新鲜海洋生物扇贝外套膜，清洗，在2℃～4℃的温度条件下切块，然后，在2℃～4℃条件下粉碎成浆，经高速离心分离，得到沉淀物；

步骤2：除去胶原蛋白以外的蛋白质

取当量浓度为0.1N的苛性钠溶液，加入步骤1得到的沉淀物中，控制苛性钠溶液与该沉淀物的质量比为15～20∶1，在温度为2℃～4℃的环境中，搅拌12小时～48小时，然后，高速离心除去上清液，用蒸馏水清洗沉淀，高速离心除去上清液，得到沉淀物原料；

步骤3：分离高分子胶原蛋白和难溶胶原蛋白

分别取摩尔浓度为0.2M～0.5M的有机酸溶液和酸性蛋白酶，混合后， 加入步骤2得到的沉淀物原料中，形成混合溶液，该混合溶液中，有机酸溶液与沉淀物原料的质量比为10～15∶1，酸性蛋白酶的基质比为0.2％～2％的，在温度为2℃～4℃的环境中，以20转/分～50转/分的速度搅拌12小时～24小时，然后，以30000rpm～100000rpm的转速离心分离，分别得到上清液和剩余物质，该上清液为高分子胶原蛋白，剩余物质为难溶胶原蛋白；

步骤4：分解难溶胶原蛋白质

将步骤3得到的难溶胶原蛋白，用蒸馏水清洗后，再加入蒸馏水稀释，形成悬浮溶液，取当量浓度为2N的氢氧化钠溶液，加入该悬浮溶液中，调节悬浮溶液的pH值为7.0，然后，在压力为1.0～2.1kg/cm²、温度为120～132℃的条件下，煮沸1小时～2小时，冷却至室温，过滤，将得到的滤液冻结干燥，制得可溶性胶原蛋白粉末；

步骤5：取蒸馏水，将步骤4制得的可溶性胶原蛋白粉末加入该蒸馏水中，控制每毫升蒸馏水中加入10毫克～30毫克的可溶性胶原蛋白粉末，得到可溶性胶原蛋白溶液；

步骤6：制备酶解蛋白肽溶液

分别取氢氧化钠溶液和蛋白酶，将氢氧化钠溶液加入步骤5得到的可溶性胶原蛋白溶液中，根据所用蛋白酶的活性作用条件，调节该可溶性胶原蛋白溶液的pH值，然后，加入蛋白酶，控制溶液中蛋白酶的基质比为0.2％～2％，并在温度为30℃～60℃的条件下，搅拌酶解8小时～48小时，之后，在温度为98℃～115℃条件下，加热10分钟～15分钟，使蛋白酶失去活性，制得酶解蛋白肽溶液；

步骤7：将步骤6制得的酶解蛋白肽溶液高速离心分离，并收集上清液，将该上清液冻结干燥，即制得难溶水产胶原蛋白源ACE抑制肽。