[发明专利]一种防治小麦病害的芽孢杆菌及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于生物农药技术领域，涉及一种防治小麦病害的新菌株，特别涉及一种防治小麦病害的芽孢杆菌及其制备方法和应用。

背景技术

小麦是世界性的重要粮食作物，全世界约有35％～40％的人口以小麦作为主要粮食(金善宝.中国小麦学.北京：中国农业出版社，1996：1-3.)。20世纪80年代以来随着矮秆、半矮秆品种的推广和水肥条件的改善，小麦病害的发生及危害在我国日趋严重。小麦条锈病在我国西南、西北麦区2001～2005年连年成灾，由偶发性病害发展成常发性病害，使得我国广大麦区的小麦生产处于条锈病大流行危害的威胁中；小麦全蚀病90年代以来在关中地区渭北旱塬、洛河下游、秦岭北麓23个县区也呈现扩大趋势。目前，还没有好的抗病品种来控制这几种小麦主要病害的发生，因而杀菌剂的应用在小麦病害的防治中仍然占有重要地位。

虽然化学防治具有见效快、效果稳定、明显、易于操作和低成本的特点，在控制小麦病害的发生中也取得了一定的成效，但无论哪种杀菌剂，大量单一类型长期使用，均有出现病菌产生抗药性的风险，而且浪费人力、物力和财力，特别是会造成环境污染。因此，在推行的无公害农药和可持续农业生产的今天，开发和研制不易产生抗药性的、较少引起污染的环境友好型生物杀菌剂已成为农药发展的必然趋势。

植物内生菌是一种能在植物组织中定殖与运转，对植物无害甚至有益的微生物，由于它在植物体内有稳定的生存空间，且能产生与宿主植物代谢相同或相似的生理活性物质，因而能有效地抑制病原菌的侵染或提高宿主植物的抗病性。近年来，随着植物内生菌(endophytes)及其物种多样性和功能多样性的发现，特别是由于内生菌的独立进化，它们可更好地适应宿主、或产生某些对宿主有益的功能如产生抗菌等生理活性物质抵抗病原菌、害虫的侵害，因而在植物病害的生物防治方面具有优势并引起了植物病理学家的广泛关注(Andrews J H.Biological control in the phylloshere.Ann RevPhytopathol，1992，30：603～605.)。本发明将报道一株内生细菌—芽孢杆菌E1R-j菌株的发现及其防病作用。

芽孢杆菌是一种比较常见的细菌，在植物病害防治的应用上备受重视。这是因为其会与病原菌竞争根系中的营养，进而成为优势菌株，降低病原菌的危害；加上可以产生内生孢子，在逆境下容易存活；且在产孢过程中能产生对多种病原菌有抑制作用的抗生物质，应用性极广。目前，对芽孢杆菌的研究很多，但是对于植物内生芽孢杆菌的研究却甚少。

发明内容

本发明的目的旨在探寻生物农药的新来源，利用植物内生菌资源而开发一种可以用于小麦主要病害防治的高效、可产业化生产的生防菌菌株及其菌株的制备方法。

实现上述发明目的的技术方案具体如下：

芽孢杆菌(Bacillussp.)E1R-j菌株，(以下简称为E1R-j菌株)，已于2007年8月16日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其简称为CGMCC，保藏中心登记入册编号为CGMCC No.2134，保藏单位地址：北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101。

本发明的E1R-j菌株分离方法，具体包括下列步骤：

1)将来自中国陕西省田间自然生长的小麦根系用自来水冲洗后展开晾干，每株取1/4根系剪碎，各植株的根段样品混合后称取1g进行表面消毒；

2)将消毒后的材料在消毒研钵中加9mL无菌水研磨至糊状，取原液、稀释100倍液和1000倍液，分别摇匀后取200μL涂在加有多菌灵的PDA平板上，每个处理重复3皿，在27℃下培养1周后，可分离到E1R-j菌株，于-80℃保藏。

所述的表面消毒的条件是样品先用70％酒精处理60s，接着在浓度为3.125％NaClO中处理6min，再用70％酒精处理30s，最后用无菌水冲洗3～5次。

所述的多菌灵是浓度为50μg/mL的25％可湿性粉剂。

检测表面消毒是否彻底的方法是将消毒后的无菌水取200μL涂在PDA平板上。

本发明的E1R-j菌株经菌落和形态的显微观察、染色反应、常规生理生化特性试验以及16S rDNA序列分析，该菌株鉴定为芽孢杆菌的一个新菌株(E1R-j)，具有以下特征：

(A)形态特征：菌体为杆状，2×8μm，革兰氏染色阳性，芽孢中生，周生鞭毛；

(B)培养特征：菌落呈现圆形，表面有皱褶，无光泽，不光滑，菌落边缘不规则扩展；