[发明专利]一种转化体及基于其制备重组人降钙素基因相关肽的方法

权利要求书

1.一种转化体，其特征在于，其宿主细胞是大肠杆菌TB1(E.coli TB1)，导入宿主细胞的表达载体为pMAL-CGRP线性载体，其中，CGRP为重组人降钙素基因相关肽基因，通过XmnⅠ酶切位点克隆入pMAL-c2X载体，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

该转化体保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC M 209021。

2.一种基于权利要求1所述转化体的重组人降钙素基因相关肽CGRP制备方法，其特征在于，包括下步骤：

1)菌株培养：

在酵母培养基中培养CCTCC M 209021菌株至对数期，然后按1∶10～1∶100的体积比例转接于50～500L的含氨苄青霉素50mg/L的酵母培养基培养，培养到对数生长期时用IPTG诱导培养3～5小时，此时CCTCC M 209021菌株表达出MBP-CGRP融合蛋白；

2)融合蛋白的纯化：

a、诱导表达后的培养液经冰冻离心机离心，收集菌体沉淀；

b、按1g菌体加5～10ml STE缓冲液的比例将冻存的湿菌重悬，然后加入裂解液进行裂解，裂解后的菌体在4℃条件下12000rpm离心20min，收集上清；

所述的STE缓冲液：20mM Tris-HCl pH 7.5，100mM NaCl，1mM EDTA；所述的裂解液：蔗糖200～500g，0.5M的EDTA 2ml，pH8.0的3M Tris-Hcl 10ml加水至1000ml；

c、上清用亲和层析柱洗脱，用洗脱液反复洗脱后收集融合蛋白洗脱峰，所述洗脱液：11g Nacl，0.5M的EDTA 2ml，pH7.4的1M Tris-Hcl 20ml加水至1000ml；

3)CGRP的纯化：

用凝血因子Xa消解收集的融合蛋白洗脱峰，从融合蛋白切下CGRP，然后通过葡聚糖G25层析柱收集CGRP。

3.如权利要求2所述的重组人降钙素基因相关肽CGRP制备方法，其特征在于，所述的裂解液为包含质量分数为1％的NP-40或者质量分数为1％的SDS。

4.如权利要求2所述的重组人降钙素基因相关肽CGRP制备方法，其特征在于，用洗脱液反复洗脱后收集融合蛋白洗脱峰，然后用密理博透析膜(Millimore)透析。