[发明专利]一种建立兰州百合高效基因枪转化体系的方法无效
| 申请号： | 200910023367.4 | 申请日： | 2009-07-17 |
| 公开（公告）号： | CN101748147A | 公开（公告）日： | 2010-06-23 |
| 发明（设计）人： | 马锋旺;师守国;李善菊;梁东;王平平;王顺才 | 申请（专利权）人： | 西北农林科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;A01H4/00 |
| 代理公司： | 西安西达专利代理有限责任公司 61202 | 代理人： | 李文义 |
| 地址： | 712100 陕西省咸阳市杨*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 建立 兰州 百合 高效 基因 转化 体系 方法 | ||
1.一种建立兰州百合高效基因枪转化体系的方法，其特征在于，包括下步步骤：
选择兰州百合组培苗的鳞片作为转化受体进行基因枪转化，采用氯化钙和亚精胺包被质粒DNA，浓度为0.4-1.2mg/L，使用1um金粉作为DNA质粒的载体，轰击高度为3-9cm，轰击次数为1-3次。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，转化的外源基因是GLDH，转化表达载体为pCAMBIA1303。
3.一种制备转基因兰州百合的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
1)将兰州百合组培苗的鳞片在含有0.2-0.6M山梨醇和0.2-0.6M甘露醇高渗培养基上预培养4h；
2)以预培养后的鳞片作为转化受体进行基因枪转化，采用氯化钙和亚精胺包被质粒DNA，浓度为0.4-1.2mg/L，直径为1um的金粉作为DNA质粒的载体，轰击高度为3-9cm，轰击次数为1-3次；
3)将轰击后鳞片在高渗培养基上培养16h，而后在分化培养基上恢复培养7d；
4)经恢复培养后的鳞片，在筛选压力为2mg/L潮霉素分化培养基上筛选培养30d，后转入5mg/L的再生培养基上继续进行筛选培养直至再生成植株；
所述的高渗培养基由MS+2.0mg/LBA+0.2mg/LNAA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂组成；
所述的分化培养基由MS+2.0mg/LBA+0.2mg/LNAA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂组成；
所述的潮霉素分化培养基由MS+2.0mg/LBA+0.2mg/LNAA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂+2mg/L hyg组成；
所述的再生培养基由MS+1.0mg/LBA+0.2mg/LNAA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂组成。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，转化的外源基因是GLDH，转化表达载体为pCAMBIA1303。
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