[发明专利]一种检测样品或制品中游离聚乙二醇含量的方法

说明书

发明领域

本发明属于一项利用反相高效液相色谱方法检测样品或制品中聚乙二醇残留的新方法，也同样适用于聚乙二醇修饰的样品或制品的修饰度的检测。该方法可应用于添加或修饰有聚乙二醇的生物制品、药品、食品、化妆品、保健品等的含量分析与检测。

背景技术

聚乙二醇是由很多重复的氧乙烷基(-CH₂-CH₂-O-)结构单元组成的线形或带支链的中性惰性大分子聚合物，其CAS登记号为25322-68-3。聚乙二醇分子无毒，无免疫原性和抗原性，其在医药工业中的应用不断扩大，目前已被美国食品与药物管理局批准用于医药、食品、保健品和化妆品等多个领域。

其中聚乙二醇在医药及生物制品中的应用主要包括以下三个方面：

(1)聚乙二醇作为一种常用的药用辅料如应用于眼药水和栓剂中，以辅助有效药物顺畅进入体内。在一些固体药物制剂如药片中添加适量分子量较大的聚乙二醇可增加药物的流动性，并提高药物有效成分在胃的溶解度从而提高其生物利用度。(2)聚乙二醇还可应用于生物制品的生产过程，如作为蛋白质纯化过程中的添加剂，可以有效提高蛋白质的回收率，保持蛋白质的生物学活性。聚乙二醇还可以作为包涵体复性的保护剂，从而避免蛋白质复性中间体的聚集，从而提高蛋白质的复性效率。(3)聚乙二醇对制品的修饰，也称长效化，即将活化的聚乙二醇通过化学手段偶联到蛋白质、多肽、小分子药物及脂质体上。修饰后的药物与母体药物相比较，在药物代谢动力学、药效学方面得到显著提升与改善。但对这些制品，尤其是药品中聚乙二醇含量要进行严格的质量控制。这也就面临建立样品或者制品中聚乙二醇含量分析的有效方法问题。目前国内比较通用的聚乙二醇含量检测方法是《中国药典》(2005版，三部，附录VI G)规定的分光光度法，主要是依据聚乙二醇与钡离子形成复合物进行比色测定。其聚乙二醇含量的检测限为微克每毫升。但该方法易受很多因素干扰，不适于一些复杂样品的分析。且当被分析的样品或制品为含有修饰有聚乙二醇的产品时，则此方法不适用。

发明内容

针对上述不足，我们设计了一种利用紫外检测器联合蒸发光检测器，或者二极管阵列检测器联合蒸发光检测器，利用聚乙二醇与其它成分包括聚乙二醇修饰产物之间极性的差别，及游离聚乙二醇与非聚乙二醇在上述2种检测器上信号的不同，优化色谱方法使之在高效液相色谱上实现分离，甄别出游离聚乙二醇的信号峰，通过外标法回归，从而很好的解决了药典中比色方法测定聚乙二醇含量的方法限制。

本发明的目的在于克服现有技术中对《中国药典》(2005版，三部，附录VI G)规定的分光光度法有干扰体系或者聚乙二醇修饰产品体系。本发明所要解决的技术问题是利用色谱方法，充分利用聚乙二醇无紫外吸收及聚乙二醇与制品尤其是聚乙二醇修饰制品间非极性的微弱差别，优化检测条件，对游离的聚乙二醇和样品或制品中其它成分进行鉴别和分离，利用外标法，计算游离聚乙二醇的含量。

本发明所述的检测样品或制品中游离聚乙二醇含量的方法，其特征在于采用紫外检测器联合蒸发光检测器，或者二极管阵列检测器联合蒸发光检测器信号对比，甄别出游离聚乙二醇信号峰，然后利用外标法对其定量。

上述的检测方法，其特征在于使用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的反相色谱柱，分别以含三氟乙酸的乙腈和三氟乙酸的超纯水为流动相，采用210-380纳米的紫外进行波长检测并与蒸发光检测信号相对比。

上述的流动相优选采用含体积百分比为0.1％三氟乙酸的乙腈和含体积百分比为0.1％三氟乙酸的超纯水。

上述的紫外检测器或二极管阵列检测器的特征检测波长优选280纳米。

上述蒸发光检测器检测到样品或制品中的最大信号峰的吸收值位于仪器检测范围之内。

上述的检测方法，其特征在于比较样品或制品在蒸发光检测器和紫外检测器，或在蒸发光检测器和二极管阵列检测器的信号的差别，区分聚乙二醇的信号和非聚乙二醇的信号；利用紫外检测器或二极管阵列检测器检测非聚乙二醇物质的吸收，利用蒸发光检测器检测聚乙二醇的信号。

上述外标法的外标物为聚乙二醇，所用外标聚乙二醇的分子量及多分散度与样品或制品中所使用的聚乙二醇相同或相似。

上述的检测方法在检测样品或制品中聚乙二醇含量，或聚乙二醇残留量或聚乙二醇修饰度方面的应用，所述样品或制品选自生物制品、药品、食品、化妆品或保健品。

以下提供本发明的主要分析步骤：

1样品预处理