[发明专利]模拟IBDV多表位基因的分子设计及其应用

权利要求书

1、模拟IBDV多表位基因epis，其特征在于，该基因的长度为471bp，编码155aa，命名为epis，其序列为SEQ ID NO.1。

2、权利要求1所述模拟IBDV多表位基因epis的所编码的多表位蛋白rEPIS，其氨基酸序列为SEQ ID NO.2。

3、权利要求1所述模拟IBDV多表位基因epis的基因工程应用。

4、权利要求1所述模拟IBDV多表位基因epis的重组表达质粒pET-epis。

5、根据权利要求4的所述模拟IBDV多表位基因epis的重组表达质粒pET-epis，其构建方法为：

化学合成权利要求1所述IBDV多表位基因epis，用pMD18-T载体克隆，获得epis重组克隆质粒pMD-epis，根据pET28b(+)启动子下游阅读框，将epis基因的克隆质粒pMD-epis和pET28b(+)质粒用限制性内切酶SacI和HindIII酶切，经琼脂糖凝胶电泳后，回收pMD-epis的epis基因片段和pET28b的载体片段，用T4DNA连接酶连接两片段，转化大肠杆菌JM109，涂布于含终浓度为30μg/mL卡那霉素的LB琼脂平板上，37℃培养14h，挑取单菌落，接种在3mL含kan的LB培养基中，振荡培养14h，抽提质粒，酶切鉴定，获取阳性重组表达质粒pET-epis。

6、权利要求4或5所述模拟IBDV多表位基因epis的重组表达质粒pET-epis转化大肠杆菌BL21(DE3)而获得的重组菌pET-epis/BL21。

7、权利要求1所述模拟IBDV多表位基因epis的IBDV表位基因工程疫苗。

8、根据权利要求7所述的IBDV表位基因工程疫苗，其制备方法为：

培养诱导权利要求5所述的重组菌pET-epis/BL21，10000r/min高速离心20min沉淀菌体，弃上清液，用pH7.2的PBS缓冲液悬浮菌体，置于0℃冰水浴，超声功率500～600W、每次超声时间10min、重复2～4次超声波破碎菌体直至浑浊菌液变为透明菌液，即为抗原重组模拟IBDV多表位蛋白rEPIS，用PBS调整抗原浓度至1000μg/mL，抗原与白油佐剂按1:1配比，乳化，即为IBDV表位基因工程疫苗。

9、权利要求7或8所述IBDV表位基因工程疫苗在制备传染性法氏囊病诊断抗原方面的应用。