[发明专利]戊型肝炎蛋白-核酸复合疫苗及其制备方法

说明书

一、技术领域

本发明涉及一种蛋白核酸复合疫苗及其制备方法，特别是涉及戊型肝炎蛋白- 核酸复合疫苗及其制备方法。

二、背景技术

戊型肝炎(Hepatitis E，HE简称戊肝)是由戊型肝炎病毒(Hepatitis E Virus， HEV)所引发的病毒性肝炎。HE目前已经成为全球严重的公共卫生问题，在东南 亚、北非及墨西哥等地有超过50次较大规模的爆发流行，而我国先后发生过11次 HE流行，被列为因HE发病和死亡而引起的经济负担最为严重的国家之一。然而对于 HE尚无特异性治疗方法，也无主动和被动免疫制剂可供预防。为了控制HE的传 播和流行，世界卫生组织已将戊型肝炎疫苗列为21世纪最优先发展的疫苗之一。

戊型肝炎病毒有四种基因型，但只有一个血清型，所以成功生产一个安全有 效的戊型肝炎疫苗已经得到广泛认可。但由于没有成熟的HEV细胞培养系统，难 以制备传统的灭活疫苗和减毒活疫苗，因此，只能发展基因工程蛋白疫苗或核酸疫苗。 虽然目前仍无商品化的戊型肝炎疫苗问世，但戊型肝炎基因工程疫苗的研究已经有了 很大的发展，现已有许多开放读码框架2基因或其片段在不同细胞中成功的表达了 HEV重组蛋白或抗原肽，且表达产物均有良好的免疫原性。戊型肝炎病毒DNA疫 苗是一种新型疫苗，应用含HEV基因片段的重组质粒免疫小鼠时，可诱导特异性的 细胞和体液免疫应答。

对于阻断戊型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒、疟原虫等感染，需 要细胞免疫和体液免疫的双重介导。然而基因工程蛋白疫苗诱导的细胞免疫水平低， 而核酸疫苗的免疫应答强度不高。为了实现细胞免疫和体液免疫的双重介导，出现了 蛋白疫苗与核酸疫苗共同使用的研究。

三、发明内容

技术问题：本发明提供一种戊型肝炎蛋白-核酸复合疫苗及其制备方法，该疫 苗以戊型肝炎病毒重组蛋白和戊型肝炎重组质粒DNA为基础，免疫动物后，能够诱导 机体产生有效地的免疫应答。与蛋白或核酸单独免疫以及蛋白初免DNA加强免疫方法 相比，具有诱导更强的体液免疫应答及有效增强细胞免疫应答的优点。

技术方案：本发明的技术解决方案为：一种戊型肝炎蛋白-核酸复合疫苗，其 特征在于包括戊型肝炎病毒重组蛋白以及戊型肝炎病毒重组质粒，其中戊型肝炎 病毒重组蛋白的含量为5-50ug/mL，戊型肝炎病毒重组质粒的含量为0.1-3mg/mL。

该疫苗还包括免疫佐剂，该免疫佐剂为氢氧化铝凝胶溶液，氢氧化铝凝胶的 浓度范围为0.6-1.5mg/mL。

戊型肝炎病毒重组蛋白与戊型肝炎病毒重组质粒的氨基末端均位于其开放阅 读框架2编码蛋白的380位至465位氨基酸之间，其羧基末端均位于590位至650 位氨基酸之间，具有SEQ ID NO：1氨基酸序列：RGIALTLFNLADTLLGGLPT ELISSAGGQLFYSRPVVSANGEPTVKLYTSVENAQQDKGIAIPHDIDLGESRVVI QDYDNQHEQDRPTPSPAPSRPFSVLRANDVLWLSLTAAEYDQTTYGSSTNPMY VSDTVTFVNVATGAQGVSRSLDWSKVTLDGRPLMTIQQYSKTFFVLPLRGKLS FWEAGTTKAGYPYNYNTTASDQILIENAAGHRVCISTYTTNLGSGPVSISAVGV LAPHSALAALEDTVDYPARAHTFDDFCPECRALGLQ。

一种用于制备戊型肝炎蛋白-核酸复合疫苗的方法，制备步骤为：a.将戊型肝 炎病毒重组蛋白吸附于氢氧化铝凝胶4℃放置18-20小时；b.将戊型肝炎病毒重组 质粒用生理盐水稀释；c.再将a和b所得的溶液混合，调整戊型肝炎病毒重组蛋白 质量浓度为5-50ug/mL，戊型肝炎病毒重组质粒的质量浓度为0.1-3mg/mL，氢氧 化铝凝胶的质量浓度为0.6-1.5mg/mL；所得的混合溶液即为戊型肝炎蛋白-核酸复 合疫苗。

所述戊型肝炎重组蛋白质量浓度优选为10ug/mL；

所述戊型肝炎病毒重组质粒的质量浓度优选为1mg/mL；

所述氢氧化铝凝胶的质量浓度优选为1.0mg/mL。