[发明专利]抑制大鼠Atpase a3基因表达的siRNA、重组慢病毒及在治疗骨吸收异常疾病的药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学、生物医药及基因工程技术领域，具有设计利用慢病毒(1entivirus，LV)介入的RNA干扰技术，构建针对大鼠Atpase a3基因的慢病毒干扰体系，并将其应用到治疗骨吸收异常疾病的新型药物开发制备中。

背景技术

破骨细胞(osteoclast，OC)是骨吸收的功能细胞，其绝对或者相对旺盛的骨吸收功能，导致骨改建平衡失调，并是骨质疏松症、Paget病、风湿性关节炎、骨巨细胞瘤及骨肿瘤侵润等多种疾病的病理基础。近年来发现Atpase a3基因表达产物为分子量116kDa的蛋白，是OC空泡型质子泵(空泡型氢离子三磷酸腺苷转运酶vacuolar type H⁺adenosinetriphosphatase，v-ATPase)关键组成部分。Li YP发现敲除Atpase a3(即Atp6i)基因可致OC功能障碍，不能使去矿物化形成吸收陷窝，发生严重骨质硬化[Li Y-p，Chen W，Liang，Y，et al.Atpi-deficient mice exhibit severe osteopetrosis due to loss of osteoclastmediated extracellular acidification.Nature Genet，1999，23：447-451]，Deng指出Atpase a3基因在OC骨吸收中有具有决定性作用[Deng W，Stashenko P，Chen W，et al.Characterization of mouse Atpase a3gene，the gene promoter，and the gene expression.J Bone Miner Res，2001，16：1136-1146]。Pringle采用延迟OC吸收过程，可保持股骨头的机械性能，明确了OC是激素性股骨头坏死的直接原因，使用OC抑制药物发现可以有效地防止股骨头缺血性坏死塌陷过程的进展[Pringle D，Koob TJ，Kim HK.Indentationproperties of growing femoral head following ischemic necrosis.J Orthop Res，2004，22(1)：122-130]。针对OC质子泵开发新的高特异性、高效率的抑制剂是目前热点问题之一，目前研究的抑制剂有Bafilomycin A1、SB242784、FR177995、FR167356等，然而这些药物的靶向性低加之其毒副作用等问题一直困扰着临床，与RNA干扰(RNA interference，RNAi)技术相比，这些药物抑制效率低下、特异性差。