[发明专利]一种用于高蛹虫草生物量和高虫草素含量的发酵方法

权利要求书

1.一种用于高蛹虫草生物量和高虫草素含量的发酵方法，包括：

1)生物型诱导子的制备：将炭角菌属银杏内生真菌(Xylaria sp)YX-28菌株接种到PDA液体培养基中，PDA液体培养基为：土豆200g、葡萄糖20g、水1000mL、pH自然，25℃、120rpm黑暗培养7d，将培养物反复冻融3次后，在冰浴条件下于超声波细胞破碎仪中1200W、超声时间5s、间隔时间3s共处理5min，10000rpm离心10min，收集上清冷冻干燥，制成20mg/mL的储备溶液，最后经0.22μm滤膜过滤除菌，得生物型诱导子；

2)非生物型诱导子制备：称取乙酸钠、硫酸铵，以体积比70％甲醇水溶液溶解，配制成浓度分别为0.07mol/L、0.056mol/L的混合溶液，经0.22μm滤膜过滤除菌，得非生物型诱导子；

3)菌种活化：将PDA斜面保存的蛹虫草(Cordyceps militaris)菌种接种到液体培养基中活化，黑暗条件下、20℃、摇床120rpm振荡培养5天，液体培养基为：土豆200g、葡萄糖20g、磷酸二氢钾0.5g、硫酸镁1g、维生素B₁0.01g、水1000ml；

4)蛹虫草发酵培养基：按糖蜜20g/L.玉米浆干粉10g/L、氯化钙0.25g/L、磷酸二氢钾0.5g/L、磷酸氢二钾0.5g/L称取各组分，以水溶解；

5)10L一级种子罐培养：按照4)所述培养基配方，以7L体积计称取所需各组分，并按体积比2‰添加消泡剂，以2-3L水溶解后加入种子罐中，121℃蒸汽灭菌15min，控制灭菌后培养基体积为罐容积的60％；培养基冷却后，采用火圈接种法将活化好的菌液按体积比10％接种到种子罐中，种子罐温度20℃，搅拌速率100rpm，无菌空气流量0.75vvm，罐压0.1Mpa，培养3天；

6)100L发酵罐培养：按照4)所述培养基配方，以70L体积计称取所需各组分，并按体积比2‰比例添加消泡剂，以40L水溶解后加入发酵罐中，121℃蒸汽灭菌15min，控制灭菌后培养基体积为罐容积的60％；培养基冷却后，通过压差法将种子罐中的种子液由专用管道转移到发酵罐中，20℃，搅拌速率100rpm，无菌空气流量0.75vvm，罐压0.1Mpa，培养96h后由补料口加入步骤1)中所述生物型诱导子过滤除菌的银杏内生真菌提取物，使终浓度为120μg/mL；继续培养，120h后由补料口加入步骤2)中所述非生物型诱导子至乙酸钠、硫酸铵的终浓度分别为0.5mmol/L、0.4mmol/L，继续培养至8天终止发酵。

2.根据权利要求1所述一种用于高蛹虫草生物量和高虫草素含量的发酵方法，其特征在于：所用消泡剂为大豆油。