[发明专利]化学沉淀法检测血清小而密低密度脂蛋白的方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种血清小而密低密度脂蛋白检测方法。

背景技术：

目前检测sdLDL的方法主要包括梯度凝胶电泳(Gradient GelElectrophoresis，GGE)；密度梯度超速离心(Density gradientultracentrifugation，DGUC)；核磁共振(Nuclear magnetic resonance，NMR)光谱法等，这些方法都是针对sdLDL某一方面的特性进行检测，各自有不同程度的局限性，如操作繁琐、耗时(需24小时以上)、需特殊昂贵设备(有的仪器需100多万元)、操作要求极高等，因而这些方法仅限于实验室研究使用，没有得到普及。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种检测sdLDL准确可靠的化学沉淀法检测血清小而密低密度脂蛋白的方法。

本发明的技术解决方案是：

一种化学沉淀法检测血清小而密低密度脂蛋白的方法，其特征是：包括下列步骤：

1)测试前标本处理：取肝素—镁试剂0.2ml加入0.2ml血清置于1.5ml离心管中，混匀，试管密封置37℃孵育10min，立即转放置4℃冰箱15min，12000rpm离心15min，取上清液作为待测标本；所述肝素—镁试剂是含145U/mL肝素、氯化镁79mmol/L、0.1g/L硫酸葡聚糖的试剂；

2)检测：经过方法处理后待测样本中仅含sdLDL而无其他低密度脂蛋白胆固醇，测定待测样本中LDL-C浓度即得该样本sdLDL浓度；具体测试方法如下：

采用包括R₁、R₂试剂的胆固醇试剂盒进行双试剂测定，R₁试剂中含有聚阴离子与sdLDL形成复合物而遮蔽sdLDL-C，血清中HDL在表面活性剂作用下与酶试剂产生不完整的Trinder反应，反应中产生的H₂O₂在缺乏偶联剂时被消耗而不显色；当加入R₂试剂时，含对sdLDL-C有特异作用的表面活性剂能水解sdLDL-C，释放出其胆固醇，参与完整的Trinder反应，测定546nm处的吸光度与sdLDL-C的浓度成正比，测定仪器为全自动生化分析仪。结果计算：sdLDL-C(mmol/L)＝标本吸光度/参考品吸光度×参考品浓度(注：各吸光度计算ΔA＝A₂—A₁)

测定主要参数为：采用二点终点法，定标模式采用二点定标，反应方向为上升，主波长为546nm，副波长为600nm，反应温度为37℃。

采用包括R₁、R₂试剂的胆固醇试剂盒对待测样本进行双试剂测定时，先将待测样本与R₁试剂反应300秒，再与R₂试剂反应300秒，待测样本、R₁试剂、R₂试剂的体积比为1:75:25。

本发明

a)反应原理：肝素与镁离子，并加入适量添加剂沉淀血清中大部分含ApoB的脂蛋白[VLDL、Lp(a)、大而轻低密度脂蛋白(large，buoyant LDL，lLDL)]，而HDL与sdLDL不被沉淀，直接测定上清液中LDL-C浓度即得sdLDL-C含量；

b)试剂与仪器：血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇试剂由上海北海生物技术工程有限公司提供；载脂蛋白A1、B试剂由上海捷门生物技术有限公司提供；葡萄糖试剂由温州东瓯生物科技有限公司提供；氯化镁由上海凌峰化学试剂有限公司提供，高密度胆固醇纯品、添加剂由Sigma公司提供，浓度为5.9mg/ml。全自动生化分析仪日立7600-020；低温超速离心机Beckman-Coulter公司AllegraTM 64R；

c)标本收集：研究对象禁止荤食3天，早晨禁止饮食和喝水，取静脉血2ml，置有盖密封试管，37℃静置30min，3000转/min离心10min，取上层血清，密封，作为待测样本，2h内完成所有生化指标检测，若不能完成需密封放置—70℃保存，保存时间不超过2个月。

本发明准确可靠，为sdLDL的检测提供了一种简便、快速的方法。

下面结合实例对本发明作进一步说明。

具体实施方式：