[发明专利]一种利用竹黄菌发酵生产超氧化物歧化酶的方法

权利要求书

1.一种利用竹黄菌发酵生产超氧化物歧化酶的方法，其特征在于以竹黄菌株Shiraia sp.SUPER-H168为出发菌株，保藏号为CCTCC M 207104，液态发酵培养基组成为：碳源5-50g/L，氮源5-50g/L，K₂HPO₄ 2-4g/L，MgSO₄·7H₂0 0.1-0.4g/L，NaCl 1-3g/L，马铃薯汁0-200g/L；在光照发酵罐内装入发酵罐体积60％-70％的培养基，灭菌冷却后接入竹黄菌，接种量为5％-10％，起始pH和发酵过程pH均为自然，发酵温度为24-32℃，发酵周期为2-5天；

在发酵过程中通过添加表面活性剂、烷烃化合物、H₂O₂或进行光照，以提高超氧化物歧化酶SOD的产量，最终发酵液中SOD活力达10-800U/mL；

经检测胞内也有少量SOD，达0.1-5U/mL；

在发酵过程中同时菌体会生成苝醌色素，产量达0.3-1.1g/L，其中竹红菌甲素占90％-93％，竹红菌乙素占2％-6％。

2.根据权利要求1所述的竹黄菌发酵生产超氧化物歧化酶的方法，其特征在于所述的碳源为葡萄糖、果糖、麦芽糖、木糖、蔗糖、乳糖、半乳糖或乳清。

3.根据权利要求1所述的竹黄菌发酵生产超氧化物歧化酶的方法，其特征在于所述的氮源为(NH₄)₂SO₄、NH₄Cl、NH₄NO₃、NaNO₃、蛋白胨、酵母膏、牛肉膏、尿素、玉米浆粉或豆饼粉。

4.根据权利要求1所述的竹黄菌发酵生产超氧化物歧化酶的方法，其特征在于所述的通过添加H₂O₂，以采用氧化胁迫的方法提高SOD产量：发酵开始后的0-40小时，往发酵液中添加H₂O₂使发酵液中H₂O₂浓度达0.1-40μmol/L，随后的发酵不再补加H₂O₂。

5.根据权利要求1所述的竹黄菌发酵生产超氧化物歧化酶的方法，其特征在于所述的通过光照方法提高SOD产量：光照强度为1000-15000Lux，光照从发酵开始后的5-40小时开始，持续时间为80-115小时。

6.根据权利要求1所述的竹黄菌发酵生产超氧化物歧化酶的方法，其特征在于所述的添加表面活性剂以提高SOD的产量，所添加表面活性剂选用：Tween20、Tween 40、Tween 60、Tween 80、Triton X-100、TritonX-114、TritonX-116、Triton X-405、TX-4、TX-6、TX-9、TX-10、AEO-3、AEO-7、AEO-9、一乙醇胺、二乙醇胺或三乙醇胺，添加时间为发酵开始后的0-40小时，使发酵液中表面活性剂的质量浓度达0.1％-2％(w/w)，随后的发酵不再补加表面活性剂。

7.根据权利要求1所述的竹黄菌发酵生产超氧化物歧化酶的方法，其特征在于所述的添加烷烃以提高SOD的产量，所添加烷烃选用：庚烷、辛烷、癸烷、十二烷、十四烷或十六烷，添加时间为发酵开始后的0-40小时，使发酵液中烷烃的质量浓度达1％-10％(w/w)，随后的发酵不再补加烷烃。