[发明专利]一种鼻咽癌EB病毒特异性DNA酶检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1. 一种鼻咽癌EB病毒特异性DNA酶检测试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒包含标准DNA，标准SYBR Green I，EB病毒特异性DNA酶，稀释缓冲液。

2. 根据权利要求1所述的鼻咽癌EB病毒特异性DNA酶检测试剂盒，其特征在于：所述标准DNA的浓度为35μg/ml，体积为15ml；所述标准SYBR Green I的浓度为10×工作液，体积为80μl；所述EB病毒特异性DNA酶的浓度0.08～0.25U/ul，体积为100μl；所述稀释缓冲液为TE Buffer，其中Tris·HCl 0.01M，EDTA 0.001M，pH 7.0，体积为20ml。

3.一种制备权利要求1的鼻咽癌EB病毒特异性DNA酶检测试剂盒的方法，包括以下步骤：

(1)标准DNA的生产和纯化：发酵培养含有p-CL质粒的大肠杆菌以生产标准DNA，所述标准DNA为p-CL质粒；提取所述的p-CL质粒；

(2)EB病毒特异性DNA酶的生产和纯化：在培养Raji细胞的过程中，以巴豆油和正丁酸作为诱导剂，同时采用Epstein-Barr病毒重复感染Raji细胞，大量生产EB病毒特异性DNA酶；纯化所述的EB病毒特异性DNA酶；

(3)标准SYBR Green I的浓度配比：固定质粒DNA含量，设置标准SYBR Green I浓度梯度，确定低浓度SYBR Gre en I含量得到较敏感的荧光信号；在标准SYBR Green I浓度确定的情况下，对标准DNA的浓度进行比例稀释，确定标准DNA的稳定的线性可测浓度范围。

4.根据权利要求3所述鼻咽癌EB病毒特异性DNA酶检测试剂盒的方法，其特征在于：步骤(1)中所述提取p-CL质粒的方法为碱裂解法。

5.根据权利要求3所述鼻咽癌EB病毒特异性DNA酶检测试剂盒的方法，其特征在于：步骤(2)中纯化所述的EB病毒特异性DNA酶的方法为离子交换层析法。