[发明专利]检测二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药的酶联免疫试剂盒

权利要求书

1.一种检测二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药的酶联免疫试剂 盒，包括盒体、固体载体、特异性抗体溶液、二抗溶液、标准溶液、 浓缩提取液、底物液、底物缓冲液、浓缩洗涤液和终止液，其特征在 于所述固体载体为酶标板，所述酶标板包被了二乙氧基硫代磷酸酯类 有机磷农药抗原；所述特异性抗体溶液为抗二乙氧基硫代磷酸酯类有 机磷农药的抗体溶液；所述二抗溶液为辣根过氧化酶标二抗溶液；所 述标准溶液为有机磷农药标准溶液；

所述有机磷农药为对硫磷、蝇毒磷、喹硫磷、三唑磷、辛硫磷、 除线磷、毒死蜱、乙基溴硫磷、氯唑磷、二嗪磷或治螟磷的任意一种 或者两种以上的混合物；

所述二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药抗原是用二乙氧基硫代 磷酰氯与氨基己酸亲核取代合成半抗原，再采用活泼酯法将半抗原与 载体蛋白进行偶联制备得到；

所述抗二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药抗体是单克隆抗体；

所述抗二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药抗体的制备方法包括 以下步骤：

(1)二乙氧基硫代磷酰氯与对羟基肉桂酸反应合成免疫半抗原；

(2)半抗原偶联载体蛋白得到免疫原；

(3)免疫原免疫Balb/c小鼠制备脾细胞，通过细胞融合，筛选 分泌目标抗体的杂交瘤细胞，采用Balb/c小鼠体内诱生法制备腹水， 纯化腹水得到抗二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药单克隆抗体。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述底物液为过 氧化氢或过氧化脲的pH5.0磷酸-柠檬酸缓冲溶液；所述底物缓冲液 为含有3，3，5，5-四甲基联苯胺或邻苯二胺的pH5.0磷酸-柠檬酸缓冲溶 液；所述终止液为5～10％硫酸、盐酸或氢氧化钠溶液；所述浓缩洗 涤液为含有0.5～1.0％吐温20的磷酸盐缓冲液。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于所述底物液为5～ 7％过氧化氢或过氧化脲的pH5.0磷酸-柠檬酸缓冲溶液；所述终止液 为10％硫酸溶液；所述浓缩洗涤液为含有1.0％吐温20和0.1mol/L 磷酸盐缓冲液。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述标准品溶液 的浓度分别为0ng/mL、0.2ng/mL、0.8ng/mL、12.8ng/mL、204.8ng/mL、 1638.4ng/mL和6553.6ng/mL。

5.一种使用权利要求1所述试剂盒检测样品中二乙氧基硫代磷 酸酯类有机磷农药残留的方法，其特征在于包括下列步骤：

(1)样品前处理；

(2)向权利要求1所述试剂盒的酶标板微孔中加入标准品溶液 或样品溶液；加入二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药抗体，温育后洗 涤拍干，加入酶标二抗，温育后洗涤拍干，显色、终止，用酶标仪测 定吸光值；

(3)检测结果分析。