[发明专利]一种应用纳米技术促进铁皮石斛快速增殖的组培方法

说明书

一、技术领域

本发明涉及一种药用石斛的快速增殖方法，属于生物技术领域。具体的讲， 是指一种采用组织培养技术对铁皮石斛进行快速繁殖的方法。

二、背景技术

植物组织培养是指用植物的各种器官、组织或细胞，在人工控制的条件下 进行无菌培养，通过生长发育的过程，产生可以用于繁殖的完整植株，并在数 量上得到大幅度的增加。该技术取材少，培养植物材料成本低，生长周期短， 管理方便。利用植物组织培养这种快速繁殖技术，能在短时间内繁衍出大量植 株，并且能较好的保持母本的遗传性状。在我国通过组织培养技术快速繁殖的 植物已有数千种。

铁皮石斛[Dendrobium officinale Kimura et Migo]是我国的一种传统名贵 中药和名贵的室内观赏植物，由于生长条件苛刻，自然条件下生长极为缓慢， 常规繁殖又较难，通过种子播种不能得到大量与亲代性状一致的植株，分株和 高位芽扦插繁殖则速度很慢，一般在1年中的繁殖速度为2-3倍。目前大量的采 挖已经使野生的铁皮石斛资源濒临灭绝。由于其具有极高的药用价值，同时铁 皮石斛花色艳丽，花期长，适合于做盆花栽培，目前国际市场市场价格为 1300-3600美元/公斤，因此极具开发利用价值。

对石斛的开发，快速繁殖是第一步。目前有关于石斛属组培快繁的技术报 道比较多，从外植体的选择、培养基的筛选等方面可以说已经相当成熟了。一 般是以成熟或未成熟的种子为材料，在有激素或无激素的培养基上萌发，形成 原球茎，原球茎继续扩增或成苗。但上述方法以种子为材料，由于石斛属植物 在自然状态下，主要以营养繁殖为主要繁殖方式，虽然开花多，当授粉结实率 低，使得种子的获得具有一定的困难，且接种时间受到严格的限制；选择幼嫩 茎尖为材料，不仅接种时间受到限制，材料数量有限，还会明显的影响栽培植 株的正常生长；不利于材料的更新。此外，在炼苗技术上，多数方法要求较高， 如要求栽在活苔藓上，才能获得较高的成功率等，所以难以大规模生产。

纳米化二氧化钛(Titanium dioxide，TiO₂)是目前最具有应用潜力和开发前 景的一种光半导体材料，其本身无毒、无味、无刺激性，并且具有价格低廉、 性能稳定、催化性能高、无污染和对人畜无毒副作用等优点。研究表明，物质 的纳米颗粒因为其所具有的巨大表面积会有利于细胞的吞噬吸收，颗粒的纳米 尺度可能会通过促进细胞的吞噬吸收来影响细胞的生理活动。同时，微量金属 元素对植物的生长有一种类似于激素(生长素和细胞分裂素)的效应，其对高等 植物具有促进其生长的功效。

三、发明专利内容

本发明的目的在于针对现有石斛组织培养方法的不足，对其进行改进，提 供一种能够适合铁皮石斛、采用组织培养技术进行快速繁殖的方法。

本发明的方法是在现有石斛组织培养技术的基础上，在培养基中加入各种 纳米化的材料，利用其吸附能力对培养基中各种成分形成的缓释作用来减少因 培养基中的物质消耗而进行的继代培养次数，以提高繁殖效率；利用其类激素 效应促进组织生长，以提高生长效率。

本发明所述的铁皮石斛快速繁殖组织培养技术方法包括以下步骤：

(1)外植体的选择与灭菌：选择当年萌生的有嫩茎尖，先用无菌水冲洗干 净，去除叶鞘，切成具有1-4个腋芽、长3-5cm段，用0.5g/L的多菌灵溶液浸 泡2-3个小时，再用75％乙醇消毒30秒钟，用0.1％升汞水浸泡20分钟，无菌 水冲洗5-6次，取出材料，切成具有一个腋芽、长度为1cm左右的小段，最后 用12％次氯酸钠杀菌30秒，无菌水冲洗5-6次。