[发明专利]一种人染色体P16基因探针的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种人染色体P16基因探针的制备方法，其特征在于制备步骤包括：

(1)克隆筛选：P16基因位于人染色体9p21区段，挑选包含有该基因的克隆；

(2)克隆培养和鉴定：购买克隆，取适量克隆菌液添加到500ml的TB培养液(氯霉素抗性)中，37℃摇床中摇菌培养24～48小时；使用STS引物对进行克隆鉴定；

(3)P16基因探针制备：对鉴定阳性的菌液，进行质粒DNA的提取；通过适当稀释质粒DNA，对质粒DNA定量；然后，通过缺口平移方法对质粒DNA进行荧光标记；对标记产物进行乙醇沉淀和浓缩；获得P16探针，避光、-20℃储存；

(4)P16基因探针验证：使用人类正常分裂中期淋巴细胞滴片进行探针验证。

2.根据权利要求1的方法，其特征还在于克隆筛选步骤中挑选的克隆号为：RP11-149I2。

3.根据权利要求1的方法，其特征还在于克隆培养和鉴定步骤中使用的STS引物序列分别为上游引物5’-ATCCAACATGCCATAGCTCC-3’和下游引物5’-TTTGTCCCATGTCACTGGAA-3。

4.根据权利要求1的方法，其特征还在于克隆培养和鉴定步骤中PCR扩增条件均为：95℃5分钟；(94℃30秒，55℃30秒，72℃45秒)×40循环；72℃10分钟。

5.根据权利要求1的方法，其特征还在于P16基因探针标记的荧光素为荧光素标记的dUTP。

6.一种P16基因探针检测试剂盒，包括：1)杂交液、DAPI复染剂，和2)分隔并集中包装这些试剂瓶或管的包装盒，其中杂交液由杂交缓冲液、荧光标记的P16基因探针和H₂O配制而成，其特征在于每人份杂交液中使用P16基因探针的量为1.5ul～3ul，杂交缓冲液为7ul。

7.根据权利要求6的试剂盒，其特征还在于杂交缓冲液中去离子甲酰胺浓度为50％～70％。