[发明专利]桑叶γ-氨基丁酸的提取方法及其应用

说明书

技术领域

本发明属于化学技术领域，具体涉及桑叶生物活性物质γ-氨基丁酸的的提取方法与应用。 

背景技术

γ-氨基丁酸(GABA)是一种功能性的非蛋白质氨基酸。自Stewatd等(1949)首次在土豆茎块中发现之后，Roberts和Udenfriend在1950年也分别在哺乳动物大脑中发现了GABA的存在，随后的研究表明，GABA分布广泛，在动物、植物和微生物中均有存在，是哺乳动物神经中枢的一种抑制性递质，具有重要的生理功能，有调节血压、促使精神安定、促进脑部血流、增进脑活力、营养神经细胞、健肝利肾等多种功效。临床医学的研究认为，GABA对改善动物的生理代谢有着重要的活性功能，能有效改善脑血流通，增加氧的供给，促进脑的代谢功能和提高生物机体的免疫能力，且具有抑制抗利尿荷尔蒙激素的分泌，扩张血管，降低血压，防止动脉硬化的作用，在神经系统的发育过程中具有营养作用，是一种神经营养因子，应用前景广阔。随着对GABA生理功能的深入了解，它被作为一种新型的功能性因子越来越引起医药、食品、化工、农业等行业的关注，成为开发研究的热点。 

自古以来，作为药食同源的桑叶，它除用作养蚕之外，早被人们用于治疗疾病和作为保健品的药膳用材料，如具有清热解毒功能的夏 桑菊中药制剂，其主成分之一就是桑叶。桑树在我国大部分地区可以种植，尤其是广东广西，全年生长时间长，有栽培容易成本低的资源优势，全国现有桑田约75万公顷，高产的桑田每公顷产量约45～50吨，故对桑叶GABA进行研究并加以开发利用，这不仅挖掘、发展一种新的GABA生物新材料，而且对我国桑叶在非绢丝产业上的利用是一种创新，将有十分重要的科学价值和广阔的市场前景。 

申请号为200410089069.2的中国专利公开了一种从桑叶中提取γ-氨基丁酸化合物的方法。以鲜桑叶为原料，通过烘前处理、真空烘燥、浸泡与浓缩、树脂分离与富集四大工序，得到含有γ-氨基丁酸化合物的桑叶提取物。该技术需要对桑叶进行费时耗能的烘前处理步骤，提取过程也比较繁琐，浸泡需要加热，容易对γ-氨基丁酸造成破坏，能耗高、产率低，而且得到的γ-氨基丁酸是一种混和物，纯度只能达到70％左右，不适合作为食品的添加剂或医药卫生使用的药物原料，不利于大规模应用生产。 

如何改进从桑叶中提取γ-氨基丁酸化合物的方法和提取条件，获得更高纯度的γ-氨基丁酸并研究其活性，对桑叶γ-氨基丁酸的开发应用十分重要。 

发明内容

本发明的目的是克服桑叶γ-氨基丁酸提取工艺的不足，提供一种简单、高效和得到高纯度产品的桑叶γ-氨基丁酸的提取方法。 

本发明还有一个目的是提供所述γ-氨基丁酸的应用。 

本发明目的通过以下技术方案予以实现： 

提供一种桑叶γ-氨基丁酸的提取方法，包括以下步骤： 

(1)桑叶干燥后进行粉碎； 

(2)取干桑叶粉加水浸泡，超声波-微波协同萃取，收集萃取上清液，旋转蒸发浓缩制得γ-氨基丁酸粗提液； 

(3)γ-氨基丁酸粗提液经无水乙醇沉淀去除部分杂蛋白和多糖类物质，再经三级分离纯化制得γ-氨基丁酸白色结晶体。 

步骤(1)所述桑叶干燥是采摘桑叶叶片，包括桑叶嫩叶或成熟叶，用清水冲洗干净，晾干，置于烘箱中在83～87℃烘28～32min后降温至63～67℃烘4～4.5h，干燥后的样品进行粉碎，过40目筛，装袋密封后低温(5～0℃)保存备用。 

步骤(2)所述加水浸泡是取干桑叶粉加水浸泡，按照桑叶粉重量克数(g)：水体积毫升数(mL)为1∶30～1∶35的比例加水，浸泡13～17min；所述萃取是将浸泡液置于微波144W、超声波50W的条件下进行常规超声波-微波协同萃取，萃取时间为160～170秒，萃取液通过离心去沉淀，收集上清液，按照常规方法旋转蒸发浓缩。 

步骤(3)包括以下步骤： 

A用无水乙醇沉淀法去除部分杂蛋白和多糖类物质； 

B用大孔树脂S-8进行一级分离纯化； 

C用葡聚糖凝胶G-10进行二级分离纯化； 

D用732磺酸型阳离子树脂进行三级分离纯化； 

E将经过三级分离纯化后的桑叶γ-氨基丁酸产物经旋转蒸发和冷冻干燥进行浓缩，获得结晶。 

其中： 

步骤A：沉淀法去除部分杂蛋白和多糖类物质 

取粗提液，按体积比1∶2倍量加入无水乙醇，过夜，在3000r/min离心10min，弃沉淀，旋转蒸发浓缩；