[发明专利]一种日本血吸虫性别特异性检测引物、检测试剂盒和检测方法

权利要求书

1.一种日本血吸虫性别特异性检测引物，其上游引物Tsexu₂核 苷酸序列：5′-ACGTTAGATACTGCTGTTCA-3′，下游引物Tsexd₂核苷 酸序列：5′-ATATTGTTCCAAGTACGCAT-3′。

2.一种日本血吸虫性别检测试剂盒，其特征在于该试剂盒包括 如下部分：

(1)DNA裂解液：Nuclei lysis solution、EDTA、蛋白酶K和 RNase A solution的混合溶液；

(2)PCR反应液：dATP、dTTP、dGTP、dCTP、引物Tsexu₂、 引物Tsexd₂和MgCl₂的混合溶液；

(3)日本血吸虫雌虫DNA阳性对照和雄虫DNA阴性对照；

(4)Taq DNA聚合酶。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于该试剂盒包括如 下部分：

(1)DNA裂解液，27.5mL：为100个反应的200μl Nuclei lysis  solution、50μl pH8.0的0.5M的EDTA、20μl 20mg/mL蛋白酶K和5μl 4mg/mL RNase A solution的混合溶液；

(2)PCR反应液，2.5mL：为终浓度200μM的dATP、dTTP、 dGTP、dCTP，终浓度0.4pmol/μl的引物Tsexu₂和Tsexd₂，2mM的 MgCl₂的混合溶液；

(3)日本血吸虫雌虫DNA阳性对照100μl和雄虫DNA阴性对 照100μl；

(4)Taq DNA聚合酶，5U/μl，25μl。

4.一种日本血吸虫性别检测方法，其特征在于该方法包括如下 步骤：

(1)日本血吸虫DNA提取；

(2)用权利要求1所述特异性检测引物采用常规PCR技术进行扩 增；

(3)扩增产物琼脂糖凝胶电泳，紫外光下观察，阳性结果会出现 特异性扩增条带，阴性结果则不会出现。

5.根据权利要求4所述日本血吸虫性别检测方法，其特征在于， 所述步骤(2)中，PCR扩增条件为94℃预变性5分钟；94℃变性1 分种、52℃退火30秒、72℃延伸1分种，35个循环；72℃后延伸5 分钟。