[发明专利]人Bcl-2和人VEGF165双基因共表达重组载体及其构建方法

权利要求书

1.人Bcl-2和人VEGF₁₆₅双基因共表达重组载体，其特征是：

1）所述重组载体包括人Bcl-2基因和人VEGF₁₆₅基因，其中Bcl-2基因序列如序列表SEQ ID No：1 所述 ；VEGF₁₆₅基因序列如序列表SEQ ID No：2所述；

2）所述重组载体利用IRES片段连接人Bcl-2、人VEGF₁₆₅基因；

3）所述人Bcl-2基因和人VEGF₁₆₅基因由A549肺癌细胞株制备得到。

2.根据权利要求1所述的人Bcl-2和人VEGF165双基因共表达重组载体，其特征是：所述载体是腺病毒载体。

3.根据权利要求1所述的人Bcl-2和人VEGF₁₆₅双基因共表达重组载体的构建方法，其特征是：包括以下几个步骤：

1）获得人Bcl-2、人VEGF₁₆₅基因；

2）构建重组腺病毒穿梭载体；

3）构建携带人Bcl-2基因、IRES片段和人VEGF₁₆₅的重组腺病毒载体质粒；

4）脂质体转染法介导重组腺病毒载体质粒在HEK293细胞中的包装。

4.根据权利要求3所述的人Bcl-2和人VEGF₁₆₅双基因共表达重组载体的构建方法，其特征是：根据Genebank中基因序列设计合成扩增 人Bcl-2和 人VEGF₁₆₅的PCR引物；

其中扩增 人Bcl-2的PCR引物序列是：

正向5’GAAGATCTATGGCGCACGCTGGGAGAA引入Bgl                                               位点，反向5’ACGCGTCGACTCACTTGTGGCTBCAGATAGGCACC引入Sal位点；

扩增 人VEGF₁₆₅的PCR引物序列是：

正向5’GCTCTAGAATGAACTTTCTGCTGTCTTGGGTGC引入Xba位点，反向5’CCGGATATCGCTCACCGCCTCGGCTTGTCACAT引入EcoRV位点。