[发明专利]一种分离基因重组蛋白的亲和-膜过滤载体的制法与应用

权利要求书

1.一种分离带有组氨酸标记的基因重组蛋白的亲和-膜过滤载体的制法，其特征在于， 包括以下步骤：

(1)水溶性载体基质的碱活化：将水溶性载体基质溶解于碱溶液中，形成混合溶液， 其中，水溶性载体基质的重量百分数的2～6％，反应后得到碱活化载体；

(2)碱活化载体的环氧活化：向碱活化载体中加入环氧氯丙烷，组成反应体系，将反 应体系在超声场中反应2～5h，反应温度为30℃～50℃，得环氧活化载体；

(3)环氧活化载体与亲和配基的偶联：将亲和配体与环氧活化载体溶液以体积比1∶1～ 3∶1进行反应，反应温度为30℃～50℃，反应时间为2～5h，得到偶联亚氨基二乙酸、偶联 次氮基三乙酸或偶联N，N，N-三羧甲基乙二胺的载体；

步骤(3)所述的亲和配体分别为亚氨基二乙酸、次氮基三乙酸或N，N，N-三羧甲基 乙二胺；

(4)偶联亲和配基的载体与金属离子的耦合：将金属离子溶液与步骤(3)所述的偶 联了亲和配基的载体溶液以体积比1∶1～3∶1进行反应，反应温度为20℃～40℃，反应时 间为2～4h，得到所述亲和-膜过滤载体；

步骤(1)所述的水溶性载体基质是葡聚糖，其分子量为1500000～3000000；

步骤(2)所述的环氧氯丙烷占反应体系的体积百分数为2～6％，超声频率为35～ 130kHz，超声功率为200W～600W；

步骤(3)所述的亲和配体的浓度为0.1～0.5mol/L，环氧活化载体溶液中环氧活化载体 的重量百分数为2～4％；

步骤(4)所述的金属离子溶液中金属离子的浓度为0.1～0.5mol/L，步骤(4)所述的 金属离子包括Cu²⁺、Co²⁺或Ni²⁺，偶联了亲和配基的载体在偶联亲和配体的载体溶液中的 重量百分数为2～4％。

2.根据权利要求1的一种分离基因重组蛋白的亲和-膜过滤载体的制法，其特征在于， 步骤(1)所述的碱溶液包括NaOH或KOH的水溶液，浓度为0.1～0.3mol/L；所述的反 应的温度为20～30℃；反应时间为20～40min。

3.一种权利要求1所述方法制备的亲和-膜过滤载体在分离带有组氨酸标记的基因重 组蛋白中的应用。